堿性磷酸酶的分離純化-袁野-wenkub
2023-06-10 18:01:48 本頁(yè)面
【正文】 準(zhǔn) A B C D 酶液體 蛋白標(biāo)準(zhǔn)液 TrisMg(AC)2 BCA試劑 1. 取試管 6支編號(hào) （體積單位為 ml）酶活性測(cè)定 2. 取試管 6支編號(hào) （體積單位為 ml）酶蛋白含量測(cè)定 管號(hào) 空白 標(biāo)準(zhǔn) A B C D 酶液體 酚標(biāo)準(zhǔn)液 TrisMg(AC)2 復(fù)合底物 1. 取試管 6支編號(hào)（體積單位為 ml） 2. 加入底物后 , 立即混勻 , 37 ℃ 準(zhǔn)確 15 min后加入 %鐵氰化鉀 ml終止反應(yīng) , 混勻 , 靜置 15 min , 510 nm比色 （大比色杯） 722S型分光光度計(jì)使用方法 1. 開機(jī)預(yù)熱 15min以上（打開蓋預(yù)熱）。 血清 AKP主要來(lái)自肝，小部分來(lái)自骨骼。 ? 用于活性測(cè)定： 用 TrisMg(AC)2緩沖液將 A液稀釋 25倍、 B液稀釋 10倍、 C液稀釋 5倍，D液不稀釋。 (2)上清液中 緩慢 加入冷 95%乙醇使其終體積為 60%（ ），混勻后 3000r/min 5min， 棄上清 ，沉淀用 3ml Mg(AC)2溶解 ,記錄 體積 c。取 B液 于 EP管，待測(cè)比活性用。 2ml正丁醇，玻璃棒攪拌 2min，室溫放置 30min，紗布過(guò)濾，置于離心管。 常用的有機(jī)溶劑沉析劑 ? 乙醇：沉析作用強(qiáng)，揮發(fā)性適中，無(wú)毒常用于蛋白質(zhì)、核酸、多糖等生物大分子的沉析； ? 丙酮：沉析作用更強(qiáng)，用量省，但毒性
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1