【正文】 段為引物，在3’OH端加入核苷酸達幾百個? 它作用的底物可以是具有3’OH末端的單鏈DNA,也可以是具有3’OH突出末端的雙鏈DNA? 堿性磷酸酶? 用于脫去DNA（RNA）5’末端的磷酸根，使5’P成為5’OH，該過程稱核酸分子的脫磷酸作用? 當需要5’端同位素標記或為了避免DNA片段自身連接（或環(huán)化）時可進行脫磷酸反應(yīng)各種載體的種類、結(jié)構(gòu)、容量及特點質(zhì)粒（plasmid）載體? 質(zhì)粒是一種獨立于染色體外的小分子環(huán)狀DNA，可自身復(fù)制和表達，有的質(zhì)粒還帶有可做為選擇性標記的抗藥性基因，經(jīng)過適當改選后便可成為良好的載體? 克隆的質(zhì)粒載體：允許外源的DNA插入，儲存? 基因表達的質(zhì)粒載體：允許外源DNA的插入、儲存和表達（1）質(zhì)粒的生物學(xué)特性①質(zhì)粒DNA的構(gòu)型：SC型 共價閉合環(huán)形DNA（cccDNA） OC型 開環(huán)DNA（ocDNA） L 型 線性DNA（cDNA）②不同質(zhì)粒的分子量大小差異相當顯著：106～108D ③作為載體的質(zhì)粒都含有三種共同的組分： 復(fù)制基因、選擇性記號、多克隆位點④質(zhì)粒DNA編碼著一些重要的非染色體控制的遺傳性狀、抗性特征、代謝特征、修飾寄主生活方式的因子等⑤質(zhì)粒DNA的接合性 非接合型:不能整合到宿主的染色體上；不能通過“接合” 而轉(zhuǎn)移⑥質(zhì)粒DNA的復(fù)制類型：? 低拷貝的質(zhì)粒（1～3）：嚴緊型復(fù)制控制的質(zhì)粒（接合型）? 高拷貝的質(zhì)粒（10~60）：松弛型復(fù)制控制的質(zhì)粒（非接合型） ⑦質(zhì)粒的不親合性? 在同一個大腸桿菌細胞，一般不能同時含有兩種不同的質(zhì)粒。 植物的細胞質(zhì)控制著很多優(yōu)良的性狀，如線粒體控制胞質(zhì)雄性不育，葉綠體控制的抗除草劑特性216。原生質(zhì)體融合不涉及到雌雄性配子，從而可以克服生殖障礙216。 缺點是：不純的酶制劑所含雜質(zhì)對原生質(zhì)體可能有不同程度的毒害作用原生質(zhì)體融合的意義（應(yīng)用找不到）216。第五章原生質(zhì)體：指采用機械或酶解法去掉細胞壁的裸露細胞 由于沒有細胞壁，原生質(zhì)體為作物遺傳改良和植物學(xué)研究提供了極為有利的試驗材料。③外植體的年齡(生理狀態(tài))與來源少數(shù)植物如胡蘿卜，幾乎所有的器官都可誘導(dǎo) 產(chǎn)生胚狀體大多數(shù)植物，在目前只有一定發(fā)育時期的某些器官可產(chǎn)生胚狀體一般以幼嫰組織作外植體較易誘導(dǎo)胚狀體④培養(yǎng)時間和細胞倍性變化的影響一般由初分離或誘導(dǎo)的或僅經(jīng)過短時期培養(yǎng)的愈傷組織，最易產(chǎn)生胚狀體隨著培養(yǎng)時間的延長，形成胚狀體的能力下降以至完全消失培養(yǎng)細胞倍性的變化可能對胚狀體的形成有一定影響⑤內(nèi)源激素水平的變化 外源生長素對體細胞胚產(chǎn)生和發(fā)育的調(diào)控是通過調(diào)節(jié)內(nèi)源激素的合成、代謝、極性運輸和平衡而起作用的第四章體細胞無性系變異：體細胞培養(yǎng)的任何階段所產(chǎn)生的變異（細胞，原生質(zhì)體，愈傷組織，再生植株等）統(tǒng)稱為體細胞無性系變異體細胞無性系變異的特點變異廣泛 包括數(shù)量性狀、質(zhì)量性狀、染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)變異，DNA擴增和減少，生化特性變化等，以數(shù)量性狀變異為主 變異頻率高 棉花體細胞培養(yǎng)獲得的每一個再生植株幾乎都存在一定程度的變異。器官發(fā)生：是指培養(yǎng)條件下的組織或細胞團（愈傷組織）分化形成不定根（adventitious roots）、不定芽（adventitious shoots）等器官的過程 。愈傷組織誘導(dǎo)的形成過程（三個時期）植物愈傷組織誘導(dǎo)(callus inducing)： 使那些已分化的體細胞包括離體的器官、組織和細胞在人工培養(yǎng)基上，經(jīng)多次細胞分裂而失去原來的分化狀態(tài)，形成無結(jié)構(gòu)的愈傷組織或細胞團的過程大致經(jīng)歷起動期，分裂期和形成期3個階段（1）起動期(誘導(dǎo)期)，外植體已分化的活細胞在外源激素的作用下，通過脫分化起動而進入分裂狀態(tài),開始形成愈傷組織。第三章愈傷組織：是指將植物上的某個部分切下，形成外植體，接種到適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其外植體組織的增生細胞產(chǎn)生的一團不定形的疏松排列的薄壁組織脫分化：使已分化的體細胞，在人工誘導(dǎo)的條件下回復(fù)到未分化的原始狀態(tài)并具有細胞全能性表達潛力的過程再分化：處于脫分化狀態(tài)的愈傷組織，再度分化成其他類型的細胞、組織、器官，甚至最終再生成完整植株的過程細胞全能性：所謂細胞的全能性，就是植物的每個細胞都具有該植物的全部遺傳信息和發(fā)育成完整植株的能力。通過幼胚培養(yǎng)產(chǎn)生的愈傷組織，經(jīng)植株再生同樣可得到遠緣雜種。胚培養(yǎng)的意義克服遠緣雜交不親和性和雜種不育性，獲得種間或?qū)匍g雜種 ，提早結(jié)實 ，提高育種效率種子生活力的快速測定(使種子無生活力或胚發(fā)育不全的植物獲得后代)離體胚培養(yǎng)時，胚發(fā)育幾種可能途徑（1）胚胎發(fā)育途徑：幼胚經(jīng)過心形期，再發(fā)育到魚雷形期，進而進入子葉期，最后萌發(fā)成苗。(3)稱出規(guī)定數(shù)量的蔗糖或葡萄糖，加水直到培養(yǎng)基最終容積 。前6種元素需要的數(shù)量較大，稱之為大量元素或主要元素后6種元素需要的數(shù)量較小，稱為微量元素或次要元素按照國際植物生理協(xié)會的建議，有機營養(yǎng)成分 主要包括碳源（糖類）和維生素類? 最常用的碳源是蔗糖和葡萄糖? 使用濃度為2%－5%? 作為植物生長發(fā)育所需的營養(yǎng)物質(zhì)? 調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的滲透壓 維生素：u 硫胺素（維生素B1）一般認為是一種必需的成分u 吡哆醇（維生素B6），煙酸（維生素B3），泛酸鈣（維生素B5）和肌醇也都能顯著地改善培養(yǎng)的植物組織生長狀況植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)(激素）主要有五大天然激素（和人工合成的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)生長素）：植物五大天然激素的合成部位吲哚乙酸 分生組織、種子細胞分裂素 根尖赤霉素 生長的種子脫落酸、乙烯 成熟、衰老和環(huán)境條件其他附加物 不是植物生長所必需的，但對細胞生長有益（1）凝固劑? 瓊脂(agar)是固體培養(yǎng)基的必要成分，瓊脂是一種由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何營養(yǎng)? 瓊脂能溶解在熱水中，成為溶膠，冷卻至40℃即凝固為固體狀凝膠。? 它的主要特點與B5相似，不用（NH4）2SO4，而改用NH4H2PO4，是無機鹽濃度較高的培養(yǎng)基? 在不少單子葉和雙子葉植物上使用，效果很好。? 無機鹽濃度較低? 適于生根培養(yǎng) ? （3）N6培養(yǎng)基? 1974年，朱至清等學(xué)者為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)而設(shè)計的? KNO3和（NH4）2SO4含量高，不含鉬? 適于花粉和花藥培養(yǎng)。? （1）MS培養(yǎng)基? 1962年Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草組織時設(shè)計的，是目前應(yīng)用最廣泛的一種培養(yǎng)基。植物生物技術(shù)的概念：植物生物技術(shù): 指對植物品質(zhì)和性狀進行改造的生物技術(shù) 植物生物技術(shù)核心技術(shù)及其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用創(chuàng)造新材料 培育新品種 開發(fā)功能食品快速繁殖稀有材料 材料的指紋分析 新基因挖掘、定位、輔助育種等第一章? 植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用：? （1）快速繁殖和規(guī)?；a(chǎn)? （2）培養(yǎng)無病毒植株? （3）培育轉(zhuǎn)基因植物? （4）突變體篩選? （5）制成人工種子? 滅菌的方法和原理? （1）滅菌方法? 物理滅菌：高溫高壓滅菌 干熱滅菌 射線照射滅菌 過濾滅菌? 化學(xué)滅菌：熏蒸滅菌 消毒液滅菌? （2）滅菌原理? （a）高溫高壓滅菌? 原理：將待滅菌的物品放在一個密封的高壓高溫滅菌鍋內(nèi)，在121℃高溫和每平方厘米1個大氣壓下，一般持續(xù)15－20 min，就可殺死一切微生物的營養(yǎng)體及其孢子，適于器皿、工具、衣物和培養(yǎng)基滅菌。? 無機鹽濃度高，養(yǎng)分平衡，尤其是銨鹽和硝酸鹽的含量很大? 它不適合生長緩慢、對無機鹽濃度要求比較低的植物，尤其不適合銨鹽過高易發(fā)生毒害的植物。? （4）B5培養(yǎng)基? 1968年由Camborh等設(shè)計的? 含有較低的銨鹽，較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素。? KM8P? Kao and Michayluk 1975? 有機成分較復(fù)雜，它包括了所有的單糖和維生素，呼吸代謝中的主要有機酸。（2）抗生素? 抗生物質(zhì)(antibiotic)，包括青霉素、鏈霉素、慶大霉素等，用量在5—20mg/L之間? 添加抗生物質(zhì)可防止菌類污染，減少培養(yǎng)中材料的損失，尤其是快速繁殖中，常因污染而丟棄成百上千瓶的培養(yǎng)物，采用適當?shù)目股乇憧晒?jié)約人力、物力和時間 （3）活性炭? 活性炭為木炭粉碎經(jīng)加工形成的粉沫結(jié)構(gòu)，它結(jié)構(gòu)疏松，孔隙大，吸水力強，有很強的吸附作用? —l0g／L ? 活性炭（active carbon）可以降低組織培養(yǎng)物的有害代謝物濃度，對細胞生長有利培養(yǎng)基的制備母液的配制 配制母液有兩個好處: ? 可減少每次配制稱量藥品的麻煩? 減少極微量藥品在每次稱量時造成的誤差（1）大量元素母液:? 可配成10倍母液,用時每配1000ml培養(yǎng)基取100ml母液（2）微量元素母液? 因含量低，一般配成100倍甚至1000倍，每配1000ml培養(yǎng)基取10ml或1ml