【正文】 操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內(nèi)。 實驗員應(yīng)愛護儀器設(shè)備，使用前應(yīng)檢查，使用后應(yīng)及時清理清潔，并定期維護保養(yǎng)，下班前應(yīng)檢查設(shè)備電源是否關(guān)閉。 量取240ml蒸餾水（稀釋水）于250ml的三角瓶中，塞上瓶塞用牛皮紙包扎好，高壓滅菌備用。 包裝：三角瓶棉塞頭部應(yīng)用錫箔紙包扎，試管集中于試管簍。目前所用培養(yǎng)基均為已配制好的生物試劑和紙片。 移液管、倒管的洗滌方法：新的移液管及倒管先在的５％鹽酸溶液中浸一小時，然后用自來水沖洗幾次，最后用蒸餾水換洗幾次。用洗衣粉水洗去油污，然后用自來水沖洗。 含有對人體有傳染性病菌的器具，應(yīng)先煮沸滅菌后再進行洗滌。 注意事項 任何洗滌方法，都不應(yīng)對玻璃器皿有所損傷，不能用有腐蝕作用的化學(xué)藥劑，也不能使用比玻璃器皿硬度大的物品來擦拭玻璃器皿。做凝集試驗用的玻片或平皿，必須經(jīng)高壓滅菌后洗滌。 經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴(yán)密的容器或鐵絲筐內(nèi)，并集中存放在指定地點，待統(tǒng)一進行高壓滅菌。 取出的合格滅菌物品，應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi)，嚴(yán)禁與未滅菌物品混放。 物品取出，隨即檢查包裝的完整性，若有破壞或棉塞脫掉，不可作為無菌物品使用。 蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放出冷氣（水沸騰后排氣10～15min）。 壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位，關(guān)好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計所標(biāo)示的狀況是否吻合，管道有無堵塞。 裝培養(yǎng)基的三角瓶塞好棉塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。 處理和接種食品標(biāo)本時，進入無菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞。要求如下： 接種細菌時必須穿工作服、帶工作帽； 進行接種食品樣品時，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用； 接種食品樣品時，應(yīng)在進無菌室前用肥皂洗手，然后用酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簦? 進行接種所用的吸管、平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用酒精點燃燒灼三次后使用； 從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及試管或平皿邊； 接種樣品、轉(zhuǎn)種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌活樣品時，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒； 接種環(huán)和針在接種細菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必要時還要燒到針和環(huán)與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min,再經(jīng)火焰燒灼； 吸管吸取菌液或樣品時，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。5 檢驗記錄和結(jié)果的報告 經(jīng)檢驗的每份樣品都應(yīng)有完整的檢驗記錄。 實驗室所用儀器、設(shè)備的性能應(yīng)定期檢查和校正。 粘性液體樣品可用滅菌容器稱取一定量，然后加入適量的稀釋液或培養(yǎng)基。如容器已裝滿，可迅速翻轉(zhuǎn)25次；如未裝滿，可于7s內(nèi)以30cm的幅度搖動25次。3 檢驗樣品的制備 樣品的全部制備過程均應(yīng)遵循無菌操作程序。 冷凍樣品應(yīng)存放在－15℃以下冰箱內(nèi)；冷卻和易腐食品應(yīng)存放在0－5℃冰箱或冷卻庫內(nèi)；其它食品可放在常溫冷暗處。 不要使樣品過度潮濕，以防食品中固有的細菌增殖。根據(jù)不同種類采樣數(shù)量略有不同，實驗室檢驗樣品一般為25克。 應(yīng)設(shè)法保持樣品原有微生物狀況，在進行檢驗前不得污染，不發(fā)生變化。（二）檢驗總則1 主題內(nèi)容與適用范圍　本文規(guī)定了微生物檢驗一般規(guī)則。4 工作完畢，兩手用清水肥皂洗凈，必要時可用（殺菌劑）新潔爾滅、過氧乙酸液浸泡手，然后用水沖洗，工作服應(yīng)經(jīng)常清洗，保持整潔，必要時高壓消毒。34微生物實驗室操作指導(dǎo)書（受控）微生物實驗室操作指導(dǎo)書目錄（一）安全守則（二）檢驗總則（三）基本技術(shù)要求（四）食品平板菌落計數(shù)（五）食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法（六）沙門氏菌檢驗（七）金黃色葡萄球菌檢驗（八）霉菌計數(shù)（九）革蘭氏染色（十）空氣中微生物的檢驗（十一） 水中微生物的檢驗（十二）食品接觸面的微生物檢驗（十三）蔬菜農(nóng)殘的快速檢測審核：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　編制： （一）安全守則1 進入實驗室工作衣、帽、鞋必須穿戴整齊。5 實驗完畢，及時清理現(xiàn)場和實驗用具，對染菌帶毒物品，進行消毒滅菌處理，并填寫日常工作記錄。本文適用于食品中微生物學(xué)檢驗的采樣、檢驗及結(jié)果報告。 采樣必須遵循無菌操作程，容器必須滅菌，避免環(huán)境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，新潔爾滅、酒精等消毒物滅菌，更不能含有此類消毒藥物，以避免殺掉樣品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需滅菌方可使用。 采樣方法 采取隨機抽樣的方式。 在將冷凍食品送到實驗室前，要始終保持樣品處于冷凍狀態(tài)。 運送冷凍和易腐食品應(yīng)在包裝容器內(nèi)加適量的冷卻劑或冷凍劑。 檢驗冷凍樣品前應(yīng)先使其融化。從混樣到檢驗間隔時間不應(yīng)超過3分鐘。 固體或半固體樣品可用滅菌的均質(zhì)杯稱取一定量，再加適量的稀釋液或培養(yǎng)基進行均質(zhì)，從樣品的均質(zhì)到稀釋和接種，相隔時間不應(yīng)超過15分鐘。 制備試劑和培養(yǎng)基所用的水，應(yīng)為無離子水或用玻璃器皿蒸餾的蒸餾水。樣品檢驗過程中所用方法、出現(xiàn)的現(xiàn)象和結(jié)果等均要用文字寫出試驗記錄，以作為對結(jié)果分析、判定的依據(jù)，記錄要求詳細、清楚、真實、客觀、不得涂改和偽造。2 無菌間使用要求 無菌間應(yīng)密封，不得隨意打開，并設(shè)有與無菌間大小相應(yīng)的緩沖間及門，另盡量設(shè)有的小窗，以備進入無菌間后傳遞物品。 在無菌間需用安裝空調(diào)時，則應(yīng)有過濾裝置。 裝放 大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品不應(yīng)超過鍋內(nèi)容積的80%，物品應(yīng)放置鍋內(nèi)擱架上或鐵絲筐中。 對有自動電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應(yīng)檢查規(guī)定的程序，是否符合于進行滅菌處理的要求。 關(guān)閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求，并維持規(guī)定時間（按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定）。 取出的物品，如為包裝有明顯的水浸者，不可作為無菌物品使用。 凡屬合格物品，應(yīng)標(biāo)有滅菌日期及有效期限。 經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物，必須經(jīng)121℃，30min高壓滅菌。 打碎的培養(yǎng)物，立即用5%煤酚皂液或石炭酸噴灑和浸泡被污染部位，浸泡半小時后再擦拭干凈。 一般新的玻璃器皿用2%的鹽酸液浸泡數(shù)小時，后用水沖洗干凈。 難洗滌的器皿不要與易洗滌的器皿放在一起，以免增加洗滌的麻煩。洗好后的器皿應(yīng)倒置晾干或置于干燥箱中干燥至無水滴。用過的移液管、倒管先用自來水洗去表面的殘液，再放在洗衣粉水中浸泡一小時以上，再用自來水沖洗至管內(nèi)壁無殘渣，最后用蒸餾水換洗次，晾干后入恒溫干燥箱中烘干。 器材三角瓶、試管、燒杯、玻棒、天平、搪瓷杯、量筒、鋁箔紙、角匙、杜氏小管、硅膠塞、電爐 培養(yǎng)基的種類營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(附加抗菌素)、平板計數(shù)瓊脂、月桂基硫酸鹽胰蛋白凍肉湯、煌綠乳糖膽鹽肉湯、EC肉湯、高鹽察氏瓊脂、三糖鐵瓊脂等 方法步驟 培養(yǎng)基的制備： 稱量：根據(jù)培養(yǎng)基的配方，稱取適量藥品于搪瓷杯中； 溶解：用量筒量取所需水量，置電爐上加熱，一邊攪拌，至完全溶解，加熱至沸騰，拔掉電源，待冷卻； 分裝：根據(jù)不同需要，立即趁熱分裝入三角瓶或試管中，分裝三角瓶以不超過三角瓶一半為宜，分裝試管一般為管長的1/5（需根據(jù)試管的大小而定）。 無菌水的制備： （稀釋水）裝入試管中。7 設(shè)備使用原則 實驗設(shè)備的使用由實驗員嚴(yán)格按照操作說明書進行，其他人員不得隨意操作。（四）食品平板菌落計數(shù)1 主題內(nèi)容與適用范圍本文規(guī)定了食品平板菌落計數(shù)的方法。如有包裝，則用75％乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。迅速振搖，將樣品混勻，制成1：100的樣品勻液。 平板接種 對于每個樣品，選用合適的三個連續(xù)稀釋度的樣品液進行平板計數(shù)。立即將平皿內(nèi)的樣品液和瓊脂培養(yǎng)基充分混合。 培養(yǎng)待瓊脂凝固后將平皿翻轉(zhuǎn)，立即放進36177。 菌落計數(shù)和記錄 培養(yǎng)后，立即計數(shù)每個平板上的菌落數(shù)。否則，應(yīng)找出原因，加以校正。5 結(jié)果報告報告每克（毫升）樣品中平板菌落數(shù)或估計的平板菌落數(shù)。1℃、177。如樣品均質(zhì)時間超過2min，應(yīng)在均質(zhì)杯外加冰水冷卻。每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯，每管接種1ml。 觀察試管的產(chǎn)氣情況：檢查倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，記錄在24h和48h內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯管數(shù)。1℃的培養(yǎng)48177。6 糞大腸菌群測定 用接種環(huán)將所有48177。2h。產(chǎn)氣管為糞大腸菌群試驗陽性；不產(chǎn)氣管為糞大腸菌群試驗陰性。2h。1℃的培養(yǎng)1824h。2h后，上層出現(xiàn)紅色為