分子生物學常見試題(轉載)-wenkub
2023-04-22 03:16:52 本頁面
【正文】 基因調(diào)控蛋白特異性識別和結,上游啟動子元件,增強子,加尾信號和一些反應元件等.6, 反式作用因子:是指真核細胞內(nèi)含有的大量可以通過直接或間接結合順式作用元件而調(diào)節(jié)基因轉錄活性的蛋白質(zhì)因子.7, 啟動子:是RNA聚合酶特異性識別和結合的DNA序列.8, 增強子:位于真核基因中遠離轉錄起始點,能明顯增強啟動子轉錄效率的特殊DNA序列.它可位于被增強的轉錄基因的上游或下游,也可相距靶基因較遠.9, 基因表達:是指生物基因組中結構基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過轉錄,翻譯等一系列過程,合成特定的蛋白質(zhì),進而發(fā)揮其特定的生物學功能和生物學效應的全過程.10, 信息分子:物質(zhì)稱為細胞間信息分子。④大小不一。⑧基因編碼區(qū)無間隔:通過宿主及病毒本身酶切。③具有操縱子結構。⑦重復序列很少.3,真核基因組的特點:①真核生物基因組遠大于原核生物基因組,結構復雜,基因數(shù)龐大,具有多個復制起點。⑤真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因,由外顯子和內(nèi)含子鑲嵌而成。⑨體細胞為雙倍體,而精子和卵子為單倍體.(二),乳糖操縱子的作用機制答:1,乳糖操縱子的組成:大腸桿菌乳糖操縱子含Z,Y,A三個結構基因,分別編碼半乳糖苷酶,透酶和半乳糖苷乙酰轉移酶,此外還有一個操縱序列O,一個啟動子P和一個調(diào)節(jié)基因I.2,阻遏蛋白的負性調(diào)節(jié):沒有乳糖存在時,I基因編碼的阻遏蛋白結合于操縱序列O處,乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài),不能合成分解乳糖的三種酶。促進或抑制RNA聚合酶與TFⅡDDNA復合物的結合。②共價修飾——磷酸化和去磷酸化,糖基化。3,可逆性。3,載體應具有可供選擇的遺傳標志,以區(qū)別陽性重組子和陰性重組子。,539。ddNTP與普通dNTP不同,它們在脫氧核糖的339。能更好地保留非共價結合的核酸.5,核酸分子的復雜性:的相對雜交速率取決于樣品濃度絕對一致時的相對復雜性(即DNA中的堿基數(shù)).6,非特異性雜交反應:在雜交前應對非特異性雜交反應位點進行封閉,以減少其對探針的非特異性吸附作用.(十四),探針的種類和優(yōu)缺點答:1,cDNA探針:通過逆轉錄獲得cDNA后,將其克隆于適當?shù)目寺≥d體,通過擴增重組質(zhì)粒而.2,基因組探針:從基因組文庫里篩選得到一個特定的基因或基因片段的克隆后,大量擴增,純化,切取插入片段,分離純化為探針.3,寡核苷酸探針:根據(jù)已知的核酸順序,采用DNA合成儀合成一定長度的寡核苷酸片段作為探針.4,RNA探針:采用基因克隆和體外轉錄的方法可以得到RNA或反義RNA作為探針.(十五),探針的標記法答:1,缺口平移法:此法是利用適當濃度的DNase Ⅰ在DNA雙鏈上隨機切割單鏈,造成單鏈切口.切口處產(chǎn)生一個5末端和3末端,3末端就可以作為引物,在大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下,以互補的DNA單鏈為摸板,依次將dNTP連接到切口的3末端的羥基上,合成新的DNA單鏈。DNA鏈延伸反應,合成的引物延伸鏈經(jīng)過變性后又可作為下一輪循環(huán)反應的模板PCR,就是如此反復循環(huán),使目的DNA得到高效快速擴增.(十七),PCR引物設計的基本要求答:1,引物長度一般為15～,過長會提高相應退火溫度,使延伸溫度超過TaqDNA聚合酶最適溫度74℃,影響產(chǎn)物的生成.2,引物的堿基盡可能隨機,避免出現(xiàn)嘌呤,39。端的互補重疊.5,引物與非特異擴增區(qū)的序列的同源性不超過70%,引物339。端最多可以游離十幾個堿基而不影響PCR反應的進行.8,引物的539。3,影響RNA轉錄和翻譯效率的因素:SD序列,mRNA。2,表達的外源片段要位于大腸桿菌啟動子的下游,并形成正確的閱讀框架。也可以通過轉入外源基因培育優(yōu)良的動物品種.3,應用:建立用于研究外源基因表達調(diào)控體系。二是產(chǎn)生新的剪接位點.③ 蛋白質(zhì)肽鏈中的片段缺失:(二十七),基因治療的策略答:1,基因置換或稱基因矯正:特定的目的基因導入特定的細胞,通過定位重組,讓導入的正?；蛑脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷基因,不涉及基因組的任何改變.2,基因添加或稱基因增補:通過導入外源基因使靶細胞表達其本身不表達的基因.3,基因干預:采用特定的方式抑制某個基因的表達,或者通過破壞某個基因而使之不能表達,以達到治療疾病的目的.4, 基因標記:基因標記實驗是基因治療的前奏,并不在于直接治療疾病而是期望能夠提供有關正常細胞生物學和疾病病理方面的信息.(二十八),基因診斷常用的生物學技術.(二十九),簡述重組DNA技術的過程.11 / 11。培育動物新品種。2,注意選擇轉染的受體細胞,不同類型的細胞具有不同的特性。5,表達產(chǎn)物的大小。具有良好的熱穩(wěn)定性,95℃仍有活性,5,引物 ,生成引物二聚體,使目的DNA,引物Tm值在5580 ℃ 范圍較為理想.6,反應溫度和循環(huán)次數(shù)(十九),影響大腸桿菌系統(tǒng)外源基因表達的因素答:1,啟動子的強弱。端堿基是引發(fā)延伸的起點,39。端和539。末端為起點的539。羥基,不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵,因此,少量的一種ddNTP,鏈延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止競爭,產(chǎn)物是一系列的核苷酸鏈,ddNTP,
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