【正文】 9號（染料索引號No 45170）溶于150ml二乙醚、70ml 95％乙醇和15ml水。 顯色： 19. 藥典：顯色裝置 噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出；浸漬顯色可用專用的玻璃器皿或用適宜的玻璃缸代替；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的干燥器代替。 17. 如果經(jīng)過一次展開后,展開槽內(nèi)仍剩下足夠的展開劑,可以展開第二塊板子嗎？ 個人認(rèn)為最好不要。弊端在于將各個組分從板上刮下的時候需更小心才不會使之混雜。樣品會分出不同的同心圓而得到分離。然后從中選擇分離效果比較好的組合。在選擇流動相的組成的時候，可以參考snyder的溶劑分類，從質(zhì)子受體，質(zhì)子給體和偶極作用的溶劑中各選擇一種，然后再選擇一個強度調(diào)節(jié)劑。 （2）細(xì)分。 14. 展開劑的選擇（分離單體）： （1）粗分，也就是當(dāng)你的樣品極性范圍比較大的時候，可以直接采用極性較小的流動相。 展開： 12. 藥典：展開容器 應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，并有嚴(yán)密的蓋子，底部應(yīng)平整光滑，或有雙槽。后者的操作各位大蝦已有論述。 薄層色譜法實踐技巧 目的： 1. 藥典：薄層色譜法系將供試品溶液點于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與事宜的對照物按同法所得的色譜圖對比，并可用薄層掃描儀進行掃描，用于鑒別、檢查或含量測定。每份硅膠G加水2—3份調(diào)成糊狀，即可使用。當(dāng)時板子鋪得太厚，后來加長研磨的時間就好了。此乃本人的慘痛經(jīng)歷，當(dāng)時不知道是硅膠過稀的原因，還以為冬天太冷板子給凍裂了，又作了一批放在暖氣房，還是照裂不務(wù)。5. 自然干燥后，放入烘干箱烘12小時以上。（2）如果有抽濾裝置你可以直接把CMCNa溶液濾過，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子），還有兩個好處一是節(jié)省CMCNa溶液，二是倒濾過的CMCNa溶液的時候不必?fù)?dān)心會把下層的不溶物倒出來了?。?三、本人的工作經(jīng)驗：薄層層析制板1. 配制4%～5%的羧甲基纖維素（CMC）：稱取CMC，溶于冷水中，邊加熱邊攪拌，直至成為清澈、透明的溶液。顛好的板，表面看上去要光滑平整，沒有氣孔。研磨好的因改是均勻的，沒有氣泡，沒有固體的粉末類異物，溶液有一定的粘性。2．就是硅膠和CMCNa溶液的比例可以適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)，根據(jù)你所需要薄層板的軟硬來微調(diào)。鋪薄層板的經(jīng)驗總結(jié),不能太稀了,不然硅膠的黏附性不好,不容易和硅膠混勻,%,這樣也不容易有氣泡,鋪好后將玻璃板放在桌邊小心上下顛動,保證薄層板所以地方都一樣均勻.,這種情況CMCNa不能太稀,容易擴散點樣量宜少,早上的時候正好薄層板已干,，如果未完全干會導(dǎo)致活化的時候薄層板硅膠開裂. 一、手工鋪板是非常考驗?zāi)愕哪土Φ氖虑?，最好是找實驗室的GGJJMMDD們一起，一來速度快，二來大家儀器交流心得?？梢砸粋€人研磨，一個人緩慢的倒CMCNa溶液。3．鋪板，我覺得是各人各喜歡，可以順著板中間倒，也可以順著某個邊緣倒，倒時也要注意不能引入小氣泡。鋪好的板，要找個干凈的地方放置晾干，這個過程也是耐心的等著它，請勿打擾！自然晾干后，活化一下（105攝氏度40分鐘左右），置于密封的干燥器保存。2. 40%硅膠：按CMC溶液的量、按40%的比例稱取薄板層析硅膠，倒入大研缽中，與CMC溶液混合，充分研磨成均勻糊狀。再在105~110℃活化，~1小時，冷卻后即可使用。浪費了整整一瓶GF254啊（做的是制備板用量較大）。 首先我想說的是手工鋪制的板子，只適宜于定性分析，不宜于分離定量。后者的操作各位大蝦已有論述。 2. 如果你是做鑒別的話，薄層的系統(tǒng)適用性主要是做檢測限和分離度； 3. 如果你是做含量測定，比如說用薄層掃描法，薄層的系統(tǒng)適用性應(yīng)該做線性范圍、同板精密度、異板精密度、回收率； 4. 手工鋪制的板子，只適宜于定性分析，不宜于分離定量； 5. 化學(xué)藥一般是作有關(guān)物質(zhì)，需要一定的載藥量，所以要適當(dāng)增加厚度； 6. 中藥一般較難分離，需要薄板，以增加分離度； 7. 手工鋪制的板子常用的有：硅膠G板和硅膠CMCNa板。 8. 如果你鋪板目的是做分析用的話，肯定得很仔細(xì)用心；如果僅是天然藥化那種粗略檢查過柱子得到的餾分純度，那就沒有必要這么復(fù)雜了，也就是說速度可以快點，板的要求也沒有必要這么高； 9. 單純的手鋪板，技巧要求很高的，如果有鋪板器（也是完全手動的那種），鋪出的板子基本上可以保證均一的。上行展開一般可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時須能密閉。然后將前沿、原點以及前沿及原點間的硅膠分別刮下，提取。經(jīng)過粗分之后，我們一般對各個部分的極性都能夠做到心中有數(shù)了。當(dāng)然，也可以參考文獻中采用的流動相。 最開始可以采用微量圓環(huán)法（將樣品點在中間，然后將流動相用毛細(xì)管從原點向圓周擴散）和小板實驗法來摸索，然后再應(yīng)用于大的制備TLC。這樣的好處有三：（1）只要操作小心，各個同心圓真的就非常圓，即不會出現(xiàn)線性層析中的邊緣效應(yīng)等。 15. 當(dāng)展開劑極性差別很大時，特別是極性大的成分所占比例很小時，往往會出現(xiàn)溶劑脫混現(xiàn)象。一般來說為得到較好的分離效果，應(yīng)先飽和一下，第二次使用如果還要飽和就會造成另一側(cè)殘留的展開劑附著在板子上，造成影響。 20. 說關(guān)于薄層板加熱變黑的問題，其實很容易解決：當(dāng)噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了，可以用電吹風(fēng)在板子背面吹吹就能顯色了。此溶液可保存一周。 24. 板鋪好后，自然涼干最好，一定是要從玻板后看也是干的，注意一定要放平，最好控制空氣流動；然后再放到烘箱中活化，這樣就不會有裂開的現(xiàn)象了； 如果直接鋪好后或者只是硅膠表面是干的，放進烘箱都會有裂開的。 27. 但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時，若改用不加CMC輔的水板來作，就不會有烘糊現(xiàn)象，但不加CMC輔的板又太軟，點樣時容易點出洞，%，這樣就不易烘黑的。 30. 配制CMCNa溶液，%，%左右，%即可。 34. 在CMCNa的溶解過程中，可以使用可進行加熱操作的磁力攪拌器，大概攪拌5小時，應(yīng)該可得到滿意的效果。倒出上清液，（非常清，也同時消除了過濾過程中可能發(fā)生的污染）。 36. 有個辦法過濾CMCNa溶液，在布氏漏斗上平鋪薄薄一層脫脂棉，千萬保證每個小孔都沒漏掉哦！用蒸餾水潤濕脫脂棉，啟動真空泵，抽緊后就可以放心大膽的倒CMCNa溶液了，保證濾過的溶液澄清透明，而且長時間放置不沉淀。要放冷。 42. CMCNa要用蒸餾水為溶劑，加熱溶解后，放冷，最好濾過使用；消泡劑可直接與CMCNa溶液混合使用； 43. 如是鋪CMCNa的薄層板，先將CMCNa溶解完全，可將溶解成所需濃度加熱后超聲處理，再抽濾，可很快得到上清液。 玻板： 49. 選擇合適的薄層板（如：2010 cm），清潔干凈（先用洗手液或洗衣粉清洗，再用自來水沖洗干凈，接著用蘸有乙醇的棉花擦拭干凈，最后把板吹干或烘干），放置于清潔處，備用。 52. 清洗玻璃板相當(dāng)重要，切記要清洗得相當(dāng)干凈，不然會在鋪板中產(chǎn)生小氣孔。 總結(jié)：完整、平滑、清潔！ 研磨： 56. 硅膠和粘合劑的比例不用固定，稀點鋪薄板，稠點鋪厚板，以目的決定比例。 59. 先在研缽中加CMC溶液，再加硅膠，按同一方向研磨，這樣更容易調(diào)勻不易包埋硅膠顆粒；稠度以用研棒粘取，成連珠狀不成線狀下滴為好；配制時遵循現(xiàn)配現(xiàn)用、少量多次的原則，因其易干影響鋪制效果。研磨時要順著一個方向，速度不宜快，要順著研缽的邊緣，觀察仔細(xì)，一定要把氣泡趕盡殺絕。 62. 建議硅膠應(yīng)配制成偏稀的狀態(tài)，這樣鋪制更容易，不必辛苦地顛好久，而且可多可少，可薄可厚。 66. 研磨時防止氣泡可以加少量的乙醇或者丙酮；加入幾滴乙醇或丁醇，可起到消泡的作用。 72. 研磨的時候確實需要沿一個方向研，不要敷衍 73. 硅膠研磨要充分，防止氣泡。表面應(yīng)均勻，平整，無麻點、無氣泡、無破損及污染。尤其是4個角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。顛板（上下左右或傾斜根據(jù)板的涂布情況而定）。重復(fù)幾次即可。此過程要與前面步驟連續(xù)進行，且不宜久顛，以保證顛好后硅膠還有一定的流動性，放置到平臺時仍可以靠自身流動修正顛板及移動所產(chǎn)生的不均。 86. 載玻片的涂布：將干燥后的載玻片兩片夾在一起，沉浸入糊狀物中，使在載玻片上形成固體層．為了浸蕉一對載玻片，用你的指間夾住載玻片的一端，并盡可能地向下進入所提供的糊狀物中．當(dāng)載波片一浸入糊狀物中后，立即以快而平穩(wěn)的速度將其拉出，并讓過量的糊狀物滴回．小心的分開載玻片，放到水平臺上，干燥．（注意：糊狀物一定要均勻；要迅速拉出載玻片，大多數(shù)人拉得太慢） 87. 研磨硅膠時，我一般取30 g硅膠H，加入５％的CMCNa 100 ml，研磨，當(dāng)將研棒提起時，硅膠象成溜似的滴下為正好。干燥后再活化，否則板會開裂。 94. 要等陰干且透后才能放入烘箱干燥活化時。 97. 鋪制好的薄層板先讓其稍干后，即看不出有明顯的水印，放入烘箱內(nèi)用50度以下的溫度并開鼓風(fēng)干燥30分鐘，再升溫干燥至干，注意升溫過快在使用的過程中有可能發(fā)生起層的現(xiàn)象，不利于分離，以上方法經(jīng)本人兩年多的實踐，效果較好且耗時又不太長。 101. 再在105~110℃活化，~1小時，冷卻后即可使用。 點樣： 105. 藥典：點樣器 一般采用微升毛細(xì)管或手動、半自動、全自動點樣器材。一般不少于8 mm，高效板供試品間隔不少于5 mm。你可以到藥店買1～2ml的注射器作為點樣器，可以滿足TLC鑒別的要求，而且很便宜哦！ 109. 點樣，我上學(xué)的時候，老師用比較便宜的進樣器（大約10幾塊錢吧，10μl即可），將針尖打磨圓滑，老師好像是用銼一點一點銼的，這樣點樣的時候樣品溶液不容易沿針尖上行（甲醇溶液都這樣），并且針尖不會刺破已經(jīng)鋪好的薄層板。都可以很好的控制點樣量，且斑點也可以滿足要求。 113. 對于點樣我也有些心得。 平衡與飽和： 114. 藥典：展開前如需要溶劑蒸氣預(yù)預(yù)平衡，可在展開缸中加入適量的展開劑，密閉，一般保持15～30分鐘，溶劑蒸氣預(yù)平衡后，應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板，立即密閉，展開。 117. 層析缸在展開前最好平衡一個小時左右，讓里面的展開劑平衡。但直到1956 年德國學(xué)者E1Stahl較完整地發(fā)展了這個方法,TLC才得到廣泛重視和研究,成為色譜法的一個重要分支,處于活躍和發(fā)展?fàn)顟B(tài)。高效液相色譜、質(zhì)譜、氣譜等屬于儀器分析。但是和傳統(tǒng)分析比較,儀器分析主要的弱點就是不靈活,必須按照固定的程序操作,更改條件比傳統(tǒng)方法繁瑣得多。TLC法有著悠久的歷史,隨著經(jīng)濟發(fā)展,對外交流增多,很多實驗室已采用商品化的薄層板,如滌綸片基硅膠板。3)可采用多種固定相及顯色手段,方法多樣而高效。以上是TLC的長處,但應(yīng)當(dāng)指出,TLC在自動化程度及分離效果上比氣相色譜和高效液相色譜稍差,分析特別復(fù)雜的樣品有時有困難,也不適于揮發(fā)性樣品的分析。1 薄層色譜的制作