【正文】 外研究．中國(guó)公共衛(wèi)生， 2022年 19卷 9期． [19]趙 紅，張淑杰，馬立人，顧定偉，等．大青葉水煎劑調(diào)節(jié)小鼠免疫細(xì)胞分泌 IL TNF— a的體外研究 . 陜西中醫(yī) .2022年 23卷 8期． [20] Hyung M K。 5 結(jié)論 通過(guò)本實(shí)驗(yàn)的研究 ,大青葉多糖水提醇沉方法的最優(yōu)提取工藝為 :85℃ 提取溫度 ,25:1的液料比 ,提取 h,提取 2 次。 本研究通過(guò)得出的最優(yōu)工藝，提取粗多糖的含量與張明 [27]等研究相比略低，評(píng)價(jià)指標(biāo)一致，都是重量法計(jì)算粗多糖的提取率，張氏用復(fù)合酶水解法提取大青葉粗多糖，提取溫度更低，多糖的的得率也比較高。 大青葉多糖提取工藝研究 10 4 討論 迄今為止，菘藍(lán)的多糖主要從板藍(lán)根中提取，大青葉中提取板藍(lán)根多糖研究較少。 分析表中數(shù)據(jù)可見(jiàn)，僅影響因素 料液比和提取次數(shù) 對(duì)大青粗糖得率影響達(dá)到顯著地步。實(shí)際應(yīng)用中料液比過(guò)小不利于浸透提取，過(guò)大又不利于濃縮和醇沉的操作，因此正交設(shè)計(jì)選取水平點(diǎn)設(shè)計(jì)為 1:15,1:25,1:35。而多糖得率則隨著提取時(shí)間的增長(zhǎng)而下降。并且是決定成本的一個(gè)重要因素。 數(shù)據(jù)處理方法 經(jīng)過(guò)不同 單因素考察 后的數(shù)據(jù)用 Excel2022 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理、作 折線 圖 ，繪制趨勢(shì)圖 。 料液比對(duì)多糖提取效果的影響 大青葉是葉類藥材，一粉即碎成細(xì)粉，煎煮容易糊鍋，不利于多糖的提取，實(shí)驗(yàn)前簡(jiǎn)單敲打破碎，不用中藥粉碎機(jī)粉碎，然后煎煮。 提取溫度對(duì)多糖提取效果的影響 溫度是多糖得率的重要影響因素之一。將粗糖稱重，計(jì)算粗糖的得率。水提醇沉工藝對(duì)設(shè)備要求簡(jiǎn)單，提取溶劑成本低廉，所以從經(jīng)濟(jì)成本、穩(wěn)定性等方面考慮，本實(shí)驗(yàn)采用傳統(tǒng)的水提醇沉工藝進(jìn)行大青葉粗多糖的提取，為今后工業(yè)化生產(chǎn)提供工藝參數(shù)，為進(jìn)一步藥理活性研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)。但是板藍(lán)根價(jià)錢高于大青葉。具有不隨害活性、分離效率高、能耗低、設(shè)備簡(jiǎn)單、可連續(xù)生產(chǎn)、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)。與酸提類似，堿提取中堿的濃度也應(yīng)得到有效控制，因?yàn)?有些多糖在堿性較強(qiáng)時(shí)會(huì)水解。如茜草多糖的提取研究中，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于水提，以稀酸提取多糖產(chǎn)品純度較高。溶劑提取為常用的傳統(tǒng) 方法之一，有自身的優(yōu)點(diǎn)。一般植物細(xì)胞壁比較牢固，在提取前需要進(jìn)行專門的破細(xì)胞操作，包括機(jī)械破碎法、溶脹和自脹、化學(xué)處理和生物酶降解。最近人們運(yùn)用新近發(fā)展的藥理模型證明靛玉紅可能是芳香基型內(nèi)源配體，可以被外源配體激活，調(diào)節(jié)多種酶系統(tǒng)以及參與細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)。由于大青葉及其代用品具有抗炎作用，人們針對(duì)其有效化學(xué)成分靛玉紅進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)靛玉紅不僅可以通過(guò) HBL38 抑制干擾素 γ 的生成 ，還可以由脾細(xì)胞抑制干擾素 γ 和白細(xì)胞介素的產(chǎn)生 [22]。趙紅等 [19]通過(guò) 3H— TdR 摻入法測(cè)定不同深度大青葉水煎劑對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞和腹腔巨噬細(xì)胞的毒性作用，用 MTT 方法 TNF 的敏感細(xì)胞株 L929．白細(xì)胞介素 IL2 的依賴株 (CTLL2)分別檢測(cè) IL TNF 的生物學(xué)活性。劉云海等 [17]采用動(dòng)態(tài)濁度法測(cè)定細(xì)菌內(nèi)毒素濃度，觀察大青葉不同化學(xué)部位對(duì)放線菌素 D 敏化小鼠內(nèi)毒素致死攻擊的保護(hù)作用，并以內(nèi)毒素制備家兔發(fā)熱模型，測(cè)定其肛溫變化，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大青葉的正丁醇萃取部位能直接 中和降解內(nèi)毒素，顯著降低內(nèi)素的致熱性和致死性，說(shuō)明其具有顯著的體內(nèi)、外抗內(nèi)毒素活性。其血凝滴度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明大多數(shù)藥材對(duì)甲型流感病毒有直接作用、治療作用和預(yù)防作用。孫立新 [13]等則 以枯草桿菌和短小芽胞桿菌作為大青葉的藥理活性檢測(cè)指標(biāo)。 藥理作用研究 大青葉具有多種化學(xué)成分和藥理作用，其不同的活性成分、化學(xué)成分的生物活性不同，或藥效作用程度不一，即使同樣的化學(xué)成分也表現(xiàn)出不同的藥理活性，由此可見(jiàn)，大青葉可能是由多種化學(xué)成 分，通過(guò)多種途徑、多個(gè)靶點(diǎn)作用于機(jī)體來(lái)發(fā)揮藥效的。 無(wú)機(jī)元素：鋅、鐵、鈣、鎂、錳、銅、鉀、鈉等無(wú)機(jī)元素 [8]。此外，靛玉紅還可以刺激感染流感病毒的支氣管上皮細(xì)胞中 T 細(xì)胞的表達(dá)和分泌，具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用 [3]。 大青葉的研究現(xiàn)狀 化學(xué)成分研究 近年來(lái)，對(duì)大青葉化學(xué)成分的文獻(xiàn)報(bào)道主要集中在生物堿、有機(jī)酸、苷類、甾醇等幾大類化合物上。葉柄長(zhǎng) 5～ 7 厘米，腹面稍凹下。 參考文獻(xiàn) .................................................................................................................................... 11 致 謝 ........................................................................................................................................ 13 大青葉多糖提取工藝研究 1 1 前言 大青葉 研究概況 來(lái)源及其藥材性狀 大青葉的來(lái)源頗多 ,全國(guó)各地有大青葉及其混淆品、代用品達(dá) 6 科 15 種之多，這么多的同名異物品當(dāng)作大青葉使用，其形成有著歷史的原因。 數(shù)據(jù)處理方法 ........................................................................................ 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 液料比對(duì)大青葉多糖得率的影響 .............................................. 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 extract 。本研究可為工業(yè)化生產(chǎn)和開(kāi)發(fā)新的中獸藥藥源提供理論依據(jù)。選取提取時(shí)間、提取溫度、提取次數(shù)和液料比四個(gè)因素，進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 學(xué)號(hào)：A06090014 大青葉多糖提取工藝研究 Study on Extraction Process of Polysaccharide fromFolium Isatidis 學(xué)生姓名： 指導(dǎo)教師： 所在學(xué)院：動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院 所學(xué)專業(yè)：動(dòng)物藥學(xué) 研究方向 ：中獸藥學(xué) 東 北 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 中國(guó)利用重量法測(cè)定大青葉粗多糖的得率。 關(guān)鍵詞：大青葉多糖；提??；正交試驗(yàn) 大青葉多糖提取工藝研究 II Study on Extraction Process of Polysaccharide from Folium Isatidis Abstract Isatis indigotica Fort.(IIF) is a twoyearold cruciferous vegetable. Its root, leave and stem are named Radix Isatis (RI)and Folium Isatis (FI), respectively. They are the mon traditional Chinese medicine with similar efficacy and representative medicines used for relieving heat and toxic. The extraction process of polysaccharides from residues targets for raw polysaccharide, which under conditions that adding 1% plex enzymes into materials and extracting for twice and hours per time at temperature of 80℃ 。 Orthogonal design 大青葉多糖提取工藝研究 III 目 錄 摘要 ................................................................................................................................................... I Abstract ............................................................................................................................................ II 目錄 ................................................................................................................................................. III 1 前言 .......................................................................................................................................... 1 大青葉 研究概況 ............................................................................................................... 1 來(lái)源及其藥材性狀 ..................................................................................................... 1 在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用 ...................................................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 提取時(shí)間對(duì)大青葉多糖得率的影響 ......................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 正交試驗(yàn)優(yōu)選 大青 葉 中大青葉 多糖水煮醇沉工藝研究 ............................................... 5 3 結(jié)果 與分析 .................................................................................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽?！吨袊?guó)藥典》自 1985 版起明確規(guī)定十字花科植物 菘藍(lán) 的葉為大青葉正品 [1]。質(zhì)脆易碎。 吲哚類生物堿：靛藍(lán)、靛玉紅、大青苷 B（有的也稱大黃素 B 和靛紅烷 B）、異靛藍(lán)。 喹唑酮類生物堿：青黛酮、 4（ 3H） 喹唑酮、 2,4（ 1H,3H） 喹唑二酮、色氨酮 [4]。 多糖類： 大量研究表明植物多糖是一種良好的免疫調(diào)節(jié)劑，廣泛存在于自然界。 抗菌作用：大青葉有抗病原微生物的作用。說(shuō)明大青葉類藥材具有廣譜的抑菌作用。王學(xué)兵 [16]等通過(guò)觀察 PK15 細(xì)胞病變效應(yīng)（ CPE）來(lái)評(píng)價(jià)大青葉多糖的不同加藥方式體外對(duì)豬細(xì)小病毒（ PPV）的阻斷和抑制大青葉多糖提取工藝研究 2 作用，結(jié)果表明大青葉多糖在對(duì)細(xì)胞的安全濃度范圍內(nèi)，對(duì)豬細(xì)小病毒有明顯的阻斷作用和抑制作用。 對(duì)免疫系統(tǒng)的作用：大青葉用來(lái)治療各種感染性疾病由來(lái)已久。結(jié)果表明大青葉水煎劑在～ ，能促進(jìn)正常小鼠被 ConA 誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞分泌 IL2，但對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌 TNFa 無(wú)明顯作用．認(rèn)為大青葉水煎劑通過(guò)促進(jìn)淋巴細(xì)胞 IL2 的分泌可以上調(diào)小鼠免疫功能，同時(shí)對(duì)巨噬細(xì)胞分泌 TNF 致炎效應(yīng)和免疫病理?yè)p傷無(wú)明顯 影響。大青葉中的另一化學(xué)成分色胺酮具有改善由右旋糖苷硫酸鈉誘發(fā)的大腸炎癥的功能。研究表明靛玉紅很可能通過(guò)誘導(dǎo) MCF7 肺癌細(xì)胞中細(xì)胞色素 P4501A1 和 1BlmRNA 酶的活性，參與調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞的新陳代謝 [24]。因此，植物多糖提取的研究中采用了許多不同的方法，包括溶劑提取、酸提法、堿提法、酶提法、超濾法、微波法等。如不需特殊設(shè)備、成本低等。但酸提法有其特殊性，只在一些特定的植物多糖提取中占有優(yōu)勢(shì)，目前報(bào)道的并不多。 酶提法 酶技術(shù)是近年來(lái)廣泛應(yīng)用的一項(xiàng)生物技術(shù)，在多