酵母rna的提取及組份鑒定與核酸的定量測定-wenkub
2022-10-31 04:00:13 本頁面
【正文】 業(yè)上常用稀堿法和濃鹽法提取 RNA，用這兩種方法所提取的核酸均為變性的 RNA，主要用作制備核苷酸的原料，其工藝比較簡單。其中苯酚法又是實驗是最常用的。 ?（２）了解核酸的組分并掌握其鑒定方法。 ?（３）學(xué)習(xí)紫外線（ UV）吸收法測定核酸濃度的原理。組織勻漿用苯酚處理并離心后， RNA即溶于上層被酚飽和的水相中， DNA和蛋白質(zhì)則留在酚層中。濃鹽法使用 10%左右氯化鈉溶液， 90℃ 提取 34h，迅速冷卻，提取液經(jīng)離心后 , 上清液用乙醇沉淀 RNA。加硫酸煮可使 RNA水解，從水解液中可用定糖，定磷和加銀沉淀等方法測出上述組份的存在。測得未知濃度核酸溶液的 A260nm值，即可以計算出其中 RNA或 DNA的含量。 RNA的 260nm與 280nm吸收的比值在 ； DNA的 260nm與280nmx吸收的比值則在 ，當(dāng)樣品中蛋白質(zhì)含量較高時，比值下降。 ? 定磷試劑： ? （ 1） 17％硫酸：將 17mL濃硫酸（比重 1084）緩緩傾入 83mL水中； ? （ 2） ％鉬酸銨： 100mL水中； ? （ 3） 10％抗壞血酸溶液： 10g抗壞血酸溶于 100mL 水，棕色并保存溶液； ? 臨用時將三種溶液和水按下
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