植物基因組dna的提取和定性、定量分析報告-wenkub
2022-08-29 19:43:19 本頁面
【正文】 【儀器、材料與試劑】 一、儀器及耗材離心機、恒溫水浴器、臺式離心機、電子天平、水平電泳槽、電泳儀、凝膠成像分析系統(tǒng)、高壓滅菌鍋、紫外線透射儀、微波爐、紫外分光光度儀、微量移液器(100、1000 μL量程各一支)、100 mL或250 mL錐形瓶、量筒、液氮、研磨棒、點樣板或parafilm、吸頭、 mL EP管、PE手套和乳膠手套。核酸分子(DNA或RNA)由于含有嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵，在260 nm波長處有特異的紫外吸收峰，其吸收強度與核酸的濃度成正比，這個物理特性為測定核酸溶液濃度提供了基礎。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。然后加入CTAB緩沖液將DNA溶解出來，再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，最后經乙醇沉淀得到DNA。.. . . ..《分子生物學》實驗報告 實驗一 植物基因組DNA的提取及其定性、定量分析【實驗目的】 通過本實驗學習利用CTAB法從植物組織中提取DNA并通過瓊脂糖凝膠電泳及紫外分光光度法對DNA進行定性定量分析。瓊脂糖凝膠電泳是分離和純化DNA片段的常用技術。由于糖磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此，在一定的電場強度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應，即DNA分子本身的大小和構型。1 OD260相當于dsDNA 50 μg/mL，ssDNA 33 μg/mL和ssRNA 40 μg/mL。二、藥品三羥甲基氨基甲烷(Tris)、CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)、β巰基乙醇、氯仿、苯酚、乙醇、氯化鈉(NaCl)、鹽酸、液氮、硼酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、溴酚藍、蔗糖、瓊脂糖、核酸染料。4. 11,500 rpm室溫離心8 min(若沒離好可重復一次)。8. 4℃，15,800 rpm離心20 min，棄上清。(2) 膠板的制備① 取有機玻璃內槽，洗凈，晾干，用橡皮膏或膠帶將有機玻璃內槽的兩端邊緣封好（一定封嚴，不能留縫隙），形成一個模具。⑤ TBE電泳緩沖液至電泳槽中，使緩沖液沒過膠面約1 mm。 (4) 電泳① 接通電泳槽與電泳儀的電源，DNA片段從負極（黑色插頭）向正極（紅色插頭）移動）。：(1) TE對待測DNA樣品按1:20或合適的倍數(shù)稀釋。點擊“set ref”鍵，儀器自動校正零點。點擊“enter” 鍵，儀器即進入分析狀態(tài)。當A260 /A280比值，說明樣品存在蛋白質或酚等雜質，可采用
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