重要病毒跨種間感染與傳播致病的分子機(jī)制研究-wenkub
2022-09-20 16:13:09 本頁(yè)面
【正文】 以及 流感病毒在家禽和哺乳動(dòng)物的生態(tài)分布， 建立自然宿主動(dòng)物病毒資源庫(kù)。 揭示 跨種間傳播中病毒 配體與受體的 作用 機(jī)制 用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)和反向遺傳操作 技術(shù)構(gòu)建系列假病毒及嵌合病毒 ， 結(jié)合蛋白質(zhì)生物大分子相互作用研究， 闡明 病毒 配體 與不同物種宿主細(xì) 胞 受體 的相互作用 機(jī)制 ，病毒侵入宿主細(xì)胞過(guò)程的囊膜蛋白－受體結(jié)合與融合機(jī)制 ； 揭示 部分新型冠狀病毒的受體 類(lèi)型及性質(zhì)，奠定 型冠狀病毒跨物種感染 研究 的 基礎(chǔ) ；通過(guò)體外真核表達(dá)病毒識(shí)別宿主細(xì)胞受體蛋白，弄清基因重要結(jié)構(gòu)位點(diǎn)的改變，對(duì)其受體結(jié)合功能和侵入細(xì)胞功能的影響，以及與病毒高致病力的關(guān)系； 應(yīng)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染等現(xiàn)代技術(shù)， 在不操作活病毒的基礎(chǔ)上，找尋黃病毒受體 。 并通過(guò) 研究病毒蛋白與宿主細(xì)胞內(nèi)蛋白的相互作用， 篩選與病毒相關(guān)蛋白發(fā)生相互作用的細(xì)胞內(nèi)靶蛋白，探討相關(guān)新蛋白與靶蛋白之間的相互作用對(duì)病毒機(jī)能的影響，并為 將來(lái)研制小分子藥物奠定理論基礎(chǔ)。 三、研究方案 學(xué)術(shù)思路 : 本項(xiàng)目 立足于我國(guó)重要病毒 傳染病 產(chǎn)生與跨種間傳播的現(xiàn)狀與國(guó)家在傳染病防控方面的重大需求， 綜合現(xiàn)代病毒生態(tài)學(xué)、分子病毒學(xué)、分子生物學(xué)、生物信息 學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和生物化學(xué)等，以解析病毒跨種間傳播機(jī)理為目標(biāo)，以新型冠狀病毒、黃病毒、狂犬病毒、流感病毒等為重點(diǎn)研究對(duì)象，利用學(xué)科交叉，發(fā)揮多學(xué)科優(yōu)勢(shì)，從病毒的生態(tài)分布、遺傳變異與進(jìn)化、病毒與宿主細(xì)胞相互作用等層面揭示重要病毒跨種間傳播與致病的分子機(jī)制（見(jiàn)圖 1）。 四、年度計(jì)劃 研究?jī)?nèi)容 預(yù)期目標(biāo) 第 一 年 1． 在全國(guó)各地大量采集 蝙蝠、嚙齒類(lèi)動(dòng)物、食蟲(chóng)目動(dòng)物的血清、咽拭子和肛拭子樣品；采集不同地區(qū)，不同動(dòng)物，包括野生動(dòng)物、動(dòng)物園動(dòng)物和特種養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)動(dòng)物、以及包括雞、豬和犬等家畜和家禽的棉拭子、組織和血液樣品 . 2． 進(jìn)行流感病毒、 新型冠狀病毒、乙腦病毒等的分離和病毒流行病學(xué)調(diào)查研究，研究病毒的宿主特征，對(duì)分離鑒定的病毒進(jìn)行全基因組測(cè)定與分析；觀察新型病毒的生物學(xué)特征，重點(diǎn)是對(duì)動(dòng)物的致病性和傳播性流感病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制； 3． 利用原核或真核細(xì)胞表達(dá)乙型腦炎病毒、登革病毒、流感病毒囊膜蛋白；利用分子篩層析、離子交換等技術(shù)分離純化蛋白；病毒囊膜蛋白的晶體篩選；建立自噬途徑研究細(xì)胞模型。 6． 人 MHC轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建 ； 高致病性禽流感病毒、西尼羅病毒等新型病毒嗜神經(jīng)生物學(xué)特征鑒定 1． 采集蝙蝠樣本 500 份；家畜樣本500 份； 2． 獲得流感病毒、新型冠狀病毒、乙腦病毒等的分離毒株和序列；獲得分離毒株的致病性和傳播性特點(diǎn)。 6． 獲得人 HLAA2/DR1 和HLAA11/DR1 轉(zhuǎn)基因小鼠。 3. 分離病毒易感細(xì)胞膜蛋白，利用 GST pulldown 的方式篩選候選受體；質(zhì)譜鑒定候選受體；研 究不同流感病毒HA 蛋白與受體的作用特征 ； 在細(xì)胞模型上研究自噬影響流感病毒侵入的分子機(jī)制。 1. 獲得 10 株以上病毒的部分基因組序列； 確定新型病毒與人類(lèi)病毒在在血清學(xué)和基因序列上的差異。 5. 篩選出 26 種分別與流感病毒和漢坦病毒相互作用的宿主限制性因子；闡明部分宿主限制性因子對(duì)流感病毒和漢坦病毒復(fù)制的影響及其作用機(jī)制；獲得狂犬病病毒感染前后宿主在蛋白質(zhì)水平的差異點(diǎn) 6. 明確高致病性禽流感病毒對(duì)在HLAA2/DR HLAA11/DR1 轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)感染特性，初步揭示 MHC限制性在高致病性禽流感病毒跨物種感染過(guò)程中的作用； 完成新型病毒的基因組測(cè)序，利 用生物信息學(xué)方法并發(fā)現(xiàn)嗜神經(jīng)性相關(guān)毒力位點(diǎn)，通過(guò)反向遺傳學(xué)手段進(jìn)行驗(yàn)證。 4. 流感病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；冠狀病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；登革病毒在不同宿主中的復(fù)制及跨種屬傳播機(jī)制；病毒在不同組織中復(fù)制的 miRNA表達(dá)譜對(duì)病毒復(fù)制的調(diào)控及分子機(jī)制； 5. 繼續(xù)探索宿主限制性因子在流感病毒及漢坦病毒復(fù)制過(guò)程中的調(diào)控機(jī)制；探索弱毒誘導(dǎo)的早期抗感染因子（宿主限制性因子）的本質(zhì)和強(qiáng)毒誘導(dǎo)的早期致病因子對(duì)宿主限制性因子的影響； 6. 病毒體內(nèi)分布實(shí) 時(shí)監(jiān)測(cè)動(dòng)物模型構(gòu)建； 新型病毒嗜神經(jīng)性相關(guān)毒力位點(diǎn)的功能研究。 4. 揭示病毒在不同宿主上生長(zhǎng)能力的動(dòng)態(tài)變化；獲得人冠狀病毒感染性克??；獲得四種病毒 RNA 上的細(xì)胞蛋白因子。 3. 根據(jù)前三年研究結(jié)果，如果未按原計(jì)劃獲得病毒的受體或輔助受體，將采用其他方法進(jìn)一步篩選；對(duì)已篩選到的受體進(jìn)行體外表達(dá)，研究病毒囊膜蛋白與受體的相互作用 。 1. 揭示蝙蝠、嚙齒類(lèi)動(dòng)物、食蟲(chóng)目動(dòng)物在病毒跨種群傳播的關(guān)鍵基因序列； 初步弄清楚我國(guó)犬流感病毒的可能的來(lái)源 。 5. 闡明不同種屬宿
研究報(bào)告相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1