沉淀反應(yīng)與凝集反應(yīng)-wenkub
2023-05-21 20:20:16 本頁面
【正文】 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (2) 操作步驟 1) 用稀釋液稀釋待檢抗原和抗原標(biāo)準(zhǔn)品 。 根據(jù)待測(cè)抗原 RU值 ， 查出相應(yīng)抗原含量 。 不同抗原含量其速率峰值不同 ， 通過微電腦處理 ， 求出抗原含量 。 所謂速率是抗原抗體結(jié)合反應(yīng)過程中 ， 在單位時(shí)間內(nèi)兩者結(jié)合的速度 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (二 ) 散射比濁法 散射光系指一定波長(zhǎng)的光沿水平軸照射 ， 碰到小顆粒的免疫復(fù)合物 ， 光線被折射 ， 發(fā)生偏轉(zhuǎn) ， 這種偏轉(zhuǎn)的角度可因光線波長(zhǎng)和顆粒大小不同而有所區(qū)別 。 (2) 加最適工作濃度 (用方陣法預(yù)先滴定 )的抗體 ，孵育一定時(shí)間 ， 測(cè)定吸光度 (A)值 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (一 ) 透射比濁法 1. 原理 抗原抗體在一定緩沖液中形成免疫復(fù)合物 (IC)， 當(dāng)光線透過反應(yīng)溶液時(shí) ， 由于溶液內(nèi)復(fù)合物粒子對(duì)光線的反射和吸收 ， 引起透射光減少 ， 免疫復(fù)合物量越多 ， 透射光越少 ，即光線吸收越多 ， 可用吸光度表示 。方法難以推廣。30min仍無沉淀環(huán)出現(xiàn)則為陰性。當(dāng)對(duì)應(yīng)的抗原與抗體相遇，在界面處形成清晰的乳 白色沉淀環(huán)。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (三 ) 方法評(píng)價(jià) 絮狀沉淀試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單，設(shè)備要求低，敏感度較低，受抗原抗體比例影響非常明顯，目前多用以測(cè)定抗原抗體反應(yīng)的最適比。 (3) 振搖使抗原 、 抗體充分混勻 ， 置 37℃ 孵育 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (一 ) 原理 抗原溶液與相應(yīng)抗體溶液混合 ， 在電解質(zhì)存在的條件下 ， 抗原與抗體結(jié)合出現(xiàn)可見的絮狀沉淀 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 沉淀反應(yīng) （ precipitation reaction) 毛旭虎 ? 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系臨床微生物學(xué)及免疫學(xué)教研室 ? 二 OO二年三月 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 可溶性 抗原 +相應(yīng)抗體 肉眼可見的沉淀 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 1897年 Kraus 就發(fā)現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)液（毒素）與相應(yīng) 抗血清混合出現(xiàn)沉淀 1905年 Bechhold 把抗體放在明膠中，將抗原加于 其中，發(fā)現(xiàn)沉淀反應(yīng)可在凝膠中進(jìn)行 1946年 Oudin 報(bào)告了試管免疫擴(kuò)散技術(shù) 1965年 Mancini 提出單向免疫擴(kuò)散技術(shù)，使定性 免疫試驗(yàn)向定量化發(fā)展 免疫濁度法的出現(xiàn)，使沉淀反應(yīng)達(dá)到快速、 微量、自動(dòng)化的新階段。 絮狀沉淀易受抗原與抗體比例的影響 ， 由此可作為最適比測(cè)定的基本方法 。 (4) 產(chǎn)生沉淀量隨抗原量而不同 ， 以出現(xiàn)沉淀物最多的管為最適比例管 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 二、環(huán)狀沉淀試驗(yàn) 環(huán)狀沉淀 (ring precipitation)試驗(yàn)是由 Ascoli于 1902年建立的一種經(jīng)典的血清學(xué)定性試驗(yàn) 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (二 ) 操作步驟 1. 用毛細(xì)滴管吸取抗血清加于沉淀管 (內(nèi)徑 約 ~2mm)底部，避免產(chǎn)生氣泡。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (三 ) 方法評(píng)價(jià) 該試驗(yàn)是經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)之一，簡(jiǎn)便、快速、實(shí)用。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 三、免疫濁度試驗(yàn) 經(jīng)典的免疫沉淀試驗(yàn)是抗原和相應(yīng)抗體在反應(yīng)終點(diǎn)時(shí)判定結(jié)果 ， 方法有耗時(shí) 、 敏感度低 (10~100mg/L)和不能自動(dòng)化等缺點(diǎn) 。 吸光度和復(fù)合物的量成正比 ， 當(dāng)抗體量固定時(shí) ， 與待檢抗原量成正比 。 (3) 以不同濃度抗原含量為橫軸 ， 吸光度為縱軸 ，繪標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 散射濁度法是在入射光的一定角度檢測(cè)粒子發(fā)出的散射光 ， 散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量呈正比 ， 即待測(cè)抗原越多 ， 形成復(fù)合物越多 ， 散射光強(qiáng)度越強(qiáng) 。 速率法是測(cè)定最大反應(yīng)速率 ， 即在抗原抗體反應(yīng)達(dá)最高峰時(shí) ，通常為數(shù)十秒鐘 ， 測(cè)定其復(fù)合物形成的量 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (2) 操作步驟： 1) 用稀釋液將待檢抗原稀釋成一定濃度 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (3) 方法評(píng)價(jià)： 檢測(cè)不必等到抗
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