sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量-wenkub
2023-05-21 13:15:20 本頁面
【正文】 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)分子量 SDS聚丙稀酰胺凝膠電泳技術(shù)是動物生物化學(xué)實驗技術(shù)教學(xué)中一個重要實驗之一。 二、實驗原理 ? 帶電質(zhì)點在電場中向帶有異相電荷的電極移動 ，這種現(xiàn)象稱為 電泳 。 （ 一 ） 分類 PAGE根據(jù)其有無濃縮效應(yīng) ， 分為連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng) 兩大類： 1. 連續(xù)系統(tǒng)： 電泳體系中緩沖液pH值及凝膠濃度相同 ， 帶電顆粒在電場作用下 ， 主要靠電荷和分子篩效應(yīng) 。 蛋白質(zhì)喪失了原有的 電荷狀態(tài) 形成僅保持原有分子大小 為特征的負(fù)離子團(tuán)塊 ， 降低或消除了各種蛋白質(zhì)分子之間天然的電荷差異 ， 因此在進(jìn)行電泳時 ， 蛋白質(zhì)分 子移速度取決于分子大小。因此在用 SDS處理樣品同時用 巰基乙醇處理 。 樣品 1：稱 3mg樣品 1，加 2 ml蒸餾水溶解 。 （ 12）脫色液：冰乙酸 75ml，甲醇 50ml，加蒸餾水定容至 1000ml。 （ 1）制膠 （簡單敘述 ） （雙層膠，摸索膠濃度） , 準(zhǔn)備 2個干凈的錐形瓶。l標(biāo)準(zhǔn)蛋白 溶解液于EP管內(nèi)，再加入 10181。l樣品溶液 ，再加入 10181。 ,加樣前 ,樣品在沸水中 加熱 3分鐘，去掉亞穩(wěn)態(tài)聚合。 ※ 剝膠時要小心 ,保持膠完好無損 ,染色要充分 。 兩條蛋白帶代表 綿羊免疫球蛋白 G的重鏈和輕鏈。 用 SDSPAGE垂直板電泳測得綿羊血清具有一定的可信度 。 3. 該實驗項目的開設(shè)，使學(xué)生掌握了利用聚丙稀酰胺凝膠電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì) 、 SDS— PAGE測定蛋白質(zhì)分子量的 基本理論及實驗技術(shù)。 。 5.“ SDS — 聚丙稀酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)分子量”一實驗的開設(shè)達(dá)到了與國內(nèi)同類院校相當(dāng)?shù)妮^高水平。 蛋白質(zhì)鹽析沉淀提取 → 凝膠層析分離（上年基金項目已完成） → DEAE纖維素分離提純蛋白質(zhì) → 蛋白質(zhì)分子量測定、生物分子純度鑒定等綜合
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