垂直板聚丙烯酰胺凝膠連續(xù)電泳分離乳酸脫氫酶同工酶-wenkub
2023-01-23 06:51:57 本頁面
【正文】 中所帶凈電荷、分子質量、形狀的差異，在電場中泳動的速度和方向不同，從而達到分離的目的。凝膠的三維網(wǎng)狀結構具有分子篩效應，不同大小和形狀的大分子通過孔徑時所受的阻滯力不同，加上大分子的電荷效應，使各種大分子遷移率不同得以分離。 式中， a為丙烯酰胺單體的質量 (g)， b為交聯(lián)劑的質量 (g)， m為溶液的終體積 (mL)。 ? 分子氧 分子氧的存在會阻止碳鏈的延長，妨礙聚合作用，在聚合過程中要盡量避免接觸空氣。 ? 硫酸自由基的氧原子激活 Acr單體并形成單體長鏈： ? Bis將單體長鏈間連成網(wǎng)狀結構： 5 6 化學聚合的凝膠孔徑較小，常用于制備分離膠，重復性好。以它為支持物發(fā)展起來的各種聚丙烯酰胺凝膠電泳技術，不僅能分離、小量制備生物大分子，而且可以用來研究生物大分子的性質如電荷、相對分子質量、等電點以及構象等。1 垂直板聚丙烯酰胺凝膠連續(xù)電泳分離乳酸脫氫酶同工酶 （活性染色鑒定法） 2 實驗原理 ? 關于垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳 ? 關于連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng) ? 關于乳酸脫氫酶同工酶及酶活性染色 3 垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳 ? 電泳 帶電顆粒在電場的作用下，向著與其電性相反的電極方向移動，這種現(xiàn)象稱之為電泳。 ? 垂直板電泳 將配制好的凝膠溶液注入到兩塊垂直放置的玻璃板之間聚膠，然后加樣進行電泳。聚合反應受各種因素的影響： ? 催化劑和加速劑的濃度 應選擇合適的 AP和 TEMED濃度使聚合時間控制在 30— 60min內較好，過量的催化劑和加速劑會引起燒膠和蛋白質條帶的畸變。 ? 雜質 某些金屬離子或其它雜質也會影響凝膠的化學聚合，所以應選擇高純度的 Acr、 Bis和 AP。 ? 凝膠 a、 b的比例決定了凝膠的物理性狀。在實際工作中，常依據(jù)待分離蛋白質已知相對分子質量的大小來選擇所合適的凝膠濃度，使蛋白質混合物得到最大限度的分離，大多數(shù)蛋白質在 %凝膠中能得到滿意的結果，所以這個濃度的凝膠稱為 標準膠 。多數(shù)蛋白質的pI在中性偏酸性范圍，通常是將樣品在堿性緩沖系統(tǒng)中進行電泳，蛋白質分子帶負電荷，以不同速度向陽極遷移，稱為 陽極電泳 ；對于一些堿性蛋白，使用酸性緩沖系統(tǒng)進行電泳，蛋白質分子帶正電荷而向陰極遷移，稱為 陰極電泳 。雖然制膠操作難度較大，但是它具有連續(xù)系統(tǒng)不可比擬的優(yōu)越性，
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