食品安全現(xiàn)代生物檢測技術(shù)-wenkub
2022-08-31 15:08:58 本頁面
【正文】 PCR反應(yīng)體系主要由引物、 dNTP、 DNA聚合酶 (TaqDNA聚合酶 )、緩沖液、 Mg2+和核酸模板組成。 ? 1 免疫吸附劑 ? 2 結(jié)合物 ? 3 酶的底物 ? 4 洗滌液 ? 5 酶反應(yīng)終止液 ? 6 陽性對照品和陰性對照品 ? 7 參考標(biāo)準(zhǔn)品 ? 三、磺胺二甲嘧啶的間接競爭 ELISA檢測 ? （一）人工完全抗原的合成 ? （二）合成抗原的鑒定 ? （三）抗體的制備與純化 ? （四）標(biāo)準(zhǔn)競爭抑制曲線的制作 ? （五）畜產(chǎn)品中 SM2殘留的 ELISA檢測 ? （六）方法評價(jià) ?1 特異性 ?2 靈敏度 ?3 準(zhǔn)確度 ?4 精確度 ? 第二節(jié) PCR檢測技術(shù) ? 一、概述 ? PCR又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (Polymerase chain reaction)，是1985年由美國的 Kary Mullis首創(chuàng)并由美國 Cetus公司開發(fā)的一項(xiàng)體外擴(kuò)增 DNA的方法。 ? （ 1）使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，井保持其免疫活性； ? （ 2）使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性．又保留酶的活性。按照是否使用標(biāo)記物分為標(biāo)記免疫測定法和非標(biāo)記免疫測定法，后者又稱為經(jīng)典免疫測定法；按反應(yīng)介質(zhì)分為均相或非均相 (免疫復(fù)合物需分離后檢測 )免疫測定法；按反應(yīng)狀態(tài)分為平衡態(tài)或非平衡態(tài)免疫測定法。第六章 食品安全現(xiàn)代生物檢測技術(shù) 第一節(jié) 免疫學(xué)檢測技術(shù) 第二節(jié) PCR檢測技術(shù) 第三節(jié) 轉(zhuǎn)基因食品的檢測技術(shù) ? 第一節(jié) 免疫學(xué)檢測技術(shù) ? 一、概述 ? 抗原與抗體的結(jié)合反應(yīng)是一切免疫測定技術(shù)的最基本原理。按照標(biāo)記物種類，標(biāo)記免疫測定法又分為放射性標(biāo)記測定法和非放射性標(biāo)記測定法。 ? （二） ELISA的類型 ? ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。應(yīng)用該方法可使極微量的特定 DNA片段在幾小時(shí)內(nèi)迅速擴(kuò)增至百萬倍，因而一經(jīng)問世便在短短的數(shù)年內(nèi)就得到了迅速發(fā)晨和實(shí)際應(yīng)用，并在原有基礎(chǔ)上結(jié)合各種生化分子生物學(xué)技術(shù)衍生出了許多改良技術(shù)。 ? （三） PCR反應(yīng)參數(shù) ? 在 PCR反應(yīng)中每輪循環(huán)的各步反應(yīng)時(shí)間不應(yīng)過長，以免降低 TaqDNA聚合酶的活性。 ? （ 3）進(jìn)行 PCR擴(kuò)增。 ? （ 1）轉(zhuǎn)基因植物食品 由轉(zhuǎn)基因植物如轉(zhuǎn)基因的玉米、大豆、水稻、馬鈴薯、番茄、香蕉、蘋果、菠菜等生產(chǎn)加工而成。后兩類轉(zhuǎn)基因食品目前在市場上還很少。 ? ? ? 特異性高，獲得結(jié)果快，儀器簡單，易于操作，對人員要求不高。 PCR擴(kuò)增待檢樣品中的靶標(biāo) DNA； ? ③觀測 PCR產(chǎn)物：通過凝膠電泳分析將PCR產(chǎn)物展現(xiàn)； ? ④確定結(jié)果：有時(shí)為了避免假阻性，還需要對 PCR產(chǎn)物進(jìn)行限制性酶切分析進(jìn)行質(zhì)量控制。 ? （ 1）半定量 PCR法 ? ①樣品 DNA的提取和定量。 ? DNA的質(zhì)量分析 ? ? CaMV35S啟動子的定量 PCR反應(yīng) ? （ 2）定量競爭 PCR法 PCR反應(yīng)實(shí)質(zhì)是對特定模板 DNA的指數(shù)擴(kuò)增放大，而在相同的條件下，獲得 DNA的量與最初模板DNA的濃度成正相關(guān)，競爭定量 PCR就是依據(jù)這種擴(kuò)增 DNA與模板 DNA之間的濃度相關(guān)性設(shè)
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1