食品安全現(xiàn)代生物檢測技術-wenkub
2022-08-31 15:08:58 本頁面
【正文】 PCR反應體系主要由引物、 dNTP、 DNA聚合酶 (TaqDNA聚合酶 )、緩沖液、 Mg2+和核酸模板組成。 ? 1 免疫吸附劑 ? 2 結合物 ? 3 酶的底物 ? 4 洗滌液 ? 5 酶反應終止液 ? 6 陽性對照品和陰性對照品 ? 7 參考標準品 ? 三、磺胺二甲嘧啶的間接競爭 ELISA檢測 ? （一）人工完全抗原的合成 ? （二）合成抗原的鑒定 ? （三）抗體的制備與純化 ? （四）標準競爭抑制曲線的制作 ? （五）畜產(chǎn)品中 SM2殘留的 ELISA檢測 ? （六）方法評價 ?1 特異性 ?2 靈敏度 ?3 準確度 ?4 精確度 ? 第二節(jié) PCR檢測技術 ? 一、概述 ? PCR又稱聚合酶鏈式反應 (Polymerase chain reaction)，是1985年由美國的 Kary Mullis首創(chuàng)并由美國 Cetus公司開發(fā)的一項體外擴增 DNA的方法。 ? （ 1）使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，井保持其免疫活性； ? （ 2）使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性．又保留酶的活性。按照是否使用標記物分為標記免疫測定法和非標記免疫測定法，后者又稱為經(jīng)典免疫測定法；按反應介質分為均相或非均相 (免疫復合物需分離后檢測 )免疫測定法；按反應狀態(tài)分為平衡態(tài)或非平衡態(tài)免疫測定法。第六章 食品安全現(xiàn)代生物檢測技術 第一節(jié) 免疫學檢測技術 第二節(jié) PCR檢測技術 第三節(jié) 轉基因食品的檢測技術 ? 第一節(jié) 免疫學檢測技術 ? 一、概述 ? 抗原與抗體的結合反應是一切免疫測定技術的最基本原理。按照標記物種類，標記免疫測定法又分為放射性標記測定法和非放射性標記測定法。 ? （二） ELISA的類型 ? ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。應用該方法可使極微量的特定 DNA片段在幾小時內迅速擴增至百萬倍，因而一經(jīng)問世便在短短的數(shù)年內就得到了迅速發(fā)晨和實際應用，并在原有基礎上結合各種生化分子生物學技術衍生出了許多改良技術。 ? （三） PCR反應參數(shù) ? 在 PCR反應中每輪循環(huán)的各步反應時間不應過長，以免降低 TaqDNA聚合酶的活性。 ? （ 3）進行 PCR擴增。 ? （ 1）轉基因植物食品 由轉基因植物如轉基因的玉米、大豆、水稻、馬鈴薯、番茄、香蕉、蘋果、菠菜等生產(chǎn)加工而成。后兩類轉基因食品目前在市場上還很少。 ? ? ? 特異性高，獲得結果快，儀器簡單，易于操作，對人員要求不高。 PCR擴增待檢樣品中的靶標 DNA； ? ③觀測 PCR產(chǎn)物：通過凝膠電泳分析將PCR產(chǎn)物展現(xiàn)； ? ④確定結果：有時為了避免假阻性，還需要對 PCR產(chǎn)物進行限制性酶切分析進行質量控制。 ? （ 1）半定量 PCR法 ? ①樣品 DNA的提取和定量。 ? DNA的質量分析 ? ? CaMV35S啟動子的定量 PCR反應 ? （ 2）定量競爭 PCR法 PCR反應實質是對特定模板 DNA的指數(shù)擴增放大，而在相同的條件下，獲得 DNA的量與最初模板DNA的濃度成正相關，競爭定量 PCR就是依據(jù)這種擴增 DNA與模板 DNA之間的濃度相關性設
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