食品安全現(xiàn)代生物檢測(cè)技術(shù)-文庫(kù)吧
2025-07-17 15:08 本頁(yè)面
【正文】 作用，也正因?yàn)槿绱怂鼈儽蛔u(yù)為 20世紀(jì) 80年代分子生物學(xué)革命和生物技術(shù)的飛躍。 ? （一） PCR原理 ? PCR是依據(jù) DNA模板的特性，模仿體內(nèi)的復(fù)制過程，在體外合適的條件下以單鏈 DNA為模板，以人工設(shè)計(jì)和合成的寡核苷酸為引物，利用熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶延 5’3’方向摻人單核苷酸來(lái)特異性的擴(kuò)增 DNA片段的技術(shù)。 ? （二） PCR反應(yīng)體系 ? PCR反應(yīng)體系主要由引物、 dNTP、 DNA聚合酶 (TaqDNA聚合酶 )、緩沖液、 Mg2+和核酸模板組成。 ? （三） PCR反應(yīng)參數(shù) ? 在 PCR反應(yīng)中每輪循環(huán)的各步反應(yīng)時(shí)間不應(yīng)過長(zhǎng)，以免降低 TaqDNA聚合酶的活性。下面介紹 PCR反應(yīng)中的一些具體參數(shù)。 ? ? ? ? ? （四）常見的 PCR種類 ? PCR ? PCR ? PCR ? PCR的 DNA指紋圖譜技術(shù) ? ? ? DNA多態(tài)性（ RAPD） ? DNA介導(dǎo)的 PCR技術(shù) ? （ REP）和基因內(nèi)重復(fù)性一致序列（ ERIC）的擴(kuò)增 ? （ AFLP） ? （ RFLP） ? RNA病毒檢測(cè)的核酸擴(kuò)增技術(shù) ? （五） PCR技術(shù)用于檢測(cè)的主要步驟 ? （ 1）運(yùn)用化學(xué)手段對(duì)目標(biāo) DNA進(jìn)行提取。 ? （ 2）設(shè)計(jì)并合成引物，引物設(shè)計(jì)或合成的好壞直接決定 PCR擴(kuò)增的成效。 ? （ 3）進(jìn)行 PCR擴(kuò)增。 ? （ 4）克隆并篩選鑒定 PCR產(chǎn)物，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳、染色，在紫外光照射下可見擴(kuò)增特異區(qū)段的 DNA帶．根據(jù)該帶的不同即可鑒定不同的 DNA。 ? （ 5） DNA序列分析 ? 第三節(jié) 轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)技術(shù) ? 一、概述 ? 轉(zhuǎn)基因食品又稱遺傳修飾食品（ geically modified food），簡(jiǎn)稱 GMF或 GM食品。轉(zhuǎn)基因食品大體上分為如下三類。 ? （ 1）轉(zhuǎn)基因植物食品 由轉(zhuǎn)基因植物如轉(zhuǎn)基因的玉米、大豆、水稻、馬鈴薯、番茄、香蕉、蘋果、菠菜等生產(chǎn)加工而成。 ? （ 2）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物食品 如轉(zhuǎn)基因的魚、雞、牛、羊等。目的主要通過導(dǎo)入外源基因或?qū)ψ陨砘蚣右孕揎梺?lái)使受體動(dòng)物降低結(jié)締組織交聯(lián)度、改善肉質(zhì)．或使受體生物個(gè)體肥大，或生產(chǎn)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高的蛋、肉、乳等。 ? （ 3）轉(zhuǎn)基因微生物食品 如轉(zhuǎn)基因微生物發(fā)酵而制得的葡萄酒、啤酒、醬油等，此類食品是利用轉(zhuǎn)基因微生物（如轉(zhuǎn)基因酵母和酶）的作用而生產(chǎn)出來(lái)的食品。后兩類轉(zhuǎn)基因食品目前在市場(chǎng)上還很少。 ? （ 一） ELISA技術(shù)與轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè) ? ? 建立在抗體抗原免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上。 ? ELISA分析法必須具備待檢測(cè)的固定相抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體、酶作用的底物三種試劑，且滿足兩個(gè)前提條件： ? 待檢測(cè)的抗原或抗體能夠結(jié)合到不溶性載體表面并保持活性； ? 標(biāo)記酶能與抗原或抗體結(jié)合并同樣 保持各自生物活性。 ? ELISA分析基本步驟如下：①將抗原（ Ag）或抗體 Ab結(jié)合到固相載體平板的孔里；②待測(cè)溶液的特殊抗原或抗體結(jié)合到敏化載體表面；③加入酶標(biāo)抗體使之與抗原或抗體化合物相結(jié)合；④結(jié)合物通過標(biāo)記酶催化底物的顏色改變而被檢測(cè)；⑤通過最后溶液的顏色深淺對(duì)待側(cè)抗原或抗體進(jìn)行定量分析。 ? ?
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