3第3章免疫原和抗血清的制備多媒體(已修改)
2025-01-25 19:19 本頁面
【正文】 第三章 免疫原和抗血清的制備 第一節(jié) 免疫原的制備 一、顆粒性抗原的制備 二、可溶性抗原的制備和純化 三、半抗原性免疫原的制備 第二節(jié) 免疫佐劑 一、佐劑的種類 二、佐劑的作用機制 第三節(jié) 抗血清的制備 一、免疫動物的選擇 二、免疫程序 三、動物采血法 第四節(jié) 抗血清的鑒定和保存 一、抗血清的鑒定 二、抗血清的保存 第五節(jié) 抗血清的純化 一、特異性 IgG抗體 二、單價特異性抗血清 思考題 小結 ? 基本要求： ? 掌握：免疫原、抗血清的制備過程。 ? 掌握：抗血清的鑒定方法、抗血清的純化方法 第一節(jié) 免疫原的制備 免疫原 (immunogen)是能誘導機體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細胞，并能在體內(nèi)外與抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生特異性反應的物質(zhì)。 顆粒性抗原－ 細胞、細菌、寄生蟲 可溶性抗原－ 蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、核酸 細胞抗原：綿羊紅細胞 細菌抗原：菌體抗原、鞭毛抗原 寄生蟲體抗原：蟲卵 一、顆粒性抗原的制備 顆粒性抗原的制備 顆粒性抗原包括人和各種動物細胞抗原以及各種細菌抗原和寄生蟲體抗原。 ? 細胞抗原： （ 綿羊紅細胞 ）一般情況下經(jīng)生理鹽水洗凈，配制一定濃度的細胞懸液，即可應用。 免疫原的制備 ? 細菌抗原多用液體或固體培養(yǎng)物，經(jīng)集菌后處理。 ? 鞭毛抗原需用 0． 3%~0． 5%的甲醛處理；菌體抗原加溫 100℃ 2~2． 5h去除鞭毛抗原；毒素抗原則在殺菌后再加 0． 5%~1． 0%氯化鈣溶液等。 ? 顆?？乖蠖嘤?靜脈內(nèi)注射 免疫法，較少加佐劑作皮內(nèi)注射。 ? 蛋白質(zhì)、糖蛋白、細菌毒素、酶、補體和核酸都是良好的可溶性抗原。 ? 這些蛋白質(zhì)多為復雜的蛋白組成，免疫前需進行純化。 二、可溶性抗原的制備和純化 組織細胞抗原的制備： 高速搗碎法－組織搗碎機搗碎 研磨法－用玻璃勻漿器或乳缽研磨 （一） 二、可溶性抗原的制備和純化 ? 高速組織搗碎機法： ? 將組織加鹽水裝入搗碎機筒內(nèi)，間斷進行離心，每次 30到 6 0分鐘，時間過長會導致產(chǎn)熱。 ? 研磨法： ? 用玻璃均漿器或乳缽研磨，經(jīng)過旋轉(zhuǎn)、壓擠將組織粉碎。 ? 組織均漿液要離心沉淀，沉淀物組織和細胞碎片，上清液為提取可溶性抗原的材料。 二、可溶性抗原的制備和純化 ? 組織細胞或培養(yǎng)細胞可溶性抗原的制備 ? 制備抗原的細胞包括正常的細胞、傳代細胞或腫瘤細胞。 ? 細胞抗原一般分為三個部分：膜蛋白抗原、細胞質(zhì)抗原（細胞器）和細胞核與核膜抗原。 二、可溶性抗原的制備和純化 組織細胞或培養(yǎng)細胞可溶性抗原的制備： 反復凍融法－ 20℃ 凍結，然后室溫融化 超聲破碎法－超聲波（ 1～ 20kHz） 自溶法－自身酶系 酶處理法－溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶 表面活性劑處理法－ SDS、去氧膽酸鈉、二乙基十六烷基溴 ? 反復冷凍法：將細胞或整塊組織置 20℃冰箱內(nèi)凍結，然后置室溫融化，如此反復兩次，大部分組織細胞及細胞內(nèi)的顆粒可凍融破碎。 ? 超聲破碎法：利用超聲波機械振動的原理使細胞破碎。常用于處理微生物和組織的細胞。 自溶法：利用組織和微生物的自身酶系統(tǒng)，在一定 PH和溫度下，使其細胞裂解。 ? 酶處理法：溶菌酶、蝸牛酶、纖維素酶等，在一定的條件下能消化細菌和組織細胞。 ? 表面活性劑處理法：常用十二烷基硫酸鈉等表面活性劑處理。 超速離心法： 差速離心法－低速和高速離心交替進行 密度梯度離心法－區(qū)帶離心法 （二）可溶性抗原的純化 超速離心分離法 ? 常用于分離亞細胞成分及大分子蛋白。 ? 差速離心法：用于分離大小差異較大的抗原顆粒 ? 梯度密度離心法：區(qū)帶分離法，通過梯度密度離心，使各類分子量的顆粒分離。（梯度柱）。 選擇性沉淀法： 核酸去除法－氯化錳、硫酸魚精蛋白、鏈霉素 鹽析法
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