3第3章免疫原和抗血清的制備多媒體(已修改)
2025-01-25 19:19 本頁(yè)面
【正文】 第三章 免疫原和抗血清的制備 第一節(jié) 免疫原的制備 一、顆粒性抗原的制備 二、可溶性抗原的制備和純化 三、半抗原性免疫原的制備 第二節(jié) 免疫佐劑 一、佐劑的種類 二、佐劑的作用機(jī)制 第三節(jié) 抗血清的制備 一、免疫動(dòng)物的選擇 二、免疫程序 三、動(dòng)物采血法 第四節(jié) 抗血清的鑒定和保存 一、抗血清的鑒定 二、抗血清的保存 第五節(jié) 抗血清的純化 一、特異性 IgG抗體 二、單價(jià)特異性抗血清 思考題 小結(jié) ? 基本要求： ? 掌握：免疫原、抗血清的制備過程。 ? 掌握：抗血清的鑒定方法、抗血清的純化方法 第一節(jié) 免疫原的制備 免疫原 (immunogen)是能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞，并能在體內(nèi)外與抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)。 顆粒性抗原－ 細(xì)胞、細(xì)菌、寄生蟲 可溶性抗原－ 蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、核酸 細(xì)胞抗原：綿羊紅細(xì)胞 細(xì)菌抗原：菌體抗原、鞭毛抗原 寄生蟲體抗原：蟲卵 一、顆粒性抗原的制備 顆粒性抗原的制備 顆粒性抗原包括人和各種動(dòng)物細(xì)胞抗原以及各種細(xì)菌抗原和寄生蟲體抗原。 ? 細(xì)胞抗原： （ 綿羊紅細(xì)胞 ）一般情況下經(jīng)生理鹽水洗凈，配制一定濃度的細(xì)胞懸液，即可應(yīng)用。 免疫原的制備 ? 細(xì)菌抗原多用液體或固體培養(yǎng)物，經(jīng)集菌后處理。 ? 鞭毛抗原需用 0． 3%~0． 5%的甲醛處理；菌體抗原加溫 100℃ 2~2． 5h去除鞭毛抗原；毒素抗原則在殺菌后再加 0． 5%~1． 0%氯化鈣溶液等。 ? 顆?？乖蠖嘤?靜脈內(nèi)注射 免疫法，較少加佐劑作皮內(nèi)注射。 ? 蛋白質(zhì)、糖蛋白、細(xì)菌毒素、酶、補(bǔ)體和核酸都是良好的可溶性抗原。 ? 這些蛋白質(zhì)多為復(fù)雜的蛋白組成，免疫前需進(jìn)行純化。 二、可溶性抗原的制備和純化 組織細(xì)胞抗原的制備： 高速搗碎法－組織搗碎機(jī)搗碎 研磨法－用玻璃勻漿器或乳缽研磨 （一） 二、可溶性抗原的制備和純化 ? 高速組織搗碎機(jī)法： ? 將組織加鹽水裝入搗碎機(jī)筒內(nèi)，間斷進(jìn)行離心，每次 30到 6 0分鐘，時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)熱。 ? 研磨法： ? 用玻璃均漿器或乳缽研磨，經(jīng)過旋轉(zhuǎn)、壓擠將組織粉碎。 ? 組織均漿液要離心沉淀，沉淀物組織和細(xì)胞碎片，上清液為提取可溶性抗原的材料。 二、可溶性抗原的制備和純化 ? 組織細(xì)胞或培養(yǎng)細(xì)胞可溶性抗原的制備 ? 制備抗原的細(xì)胞包括正常的細(xì)胞、傳代細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞。 ? 細(xì)胞抗原一般分為三個(gè)部分：膜蛋白抗原、細(xì)胞質(zhì)抗原（細(xì)胞器）和細(xì)胞核與核膜抗原。 二、可溶性抗原的制備和純化 組織細(xì)胞或培養(yǎng)細(xì)胞可溶性抗原的制備： 反復(fù)凍融法－ 20℃ 凍結(jié)，然后室溫融化 超聲破碎法－超聲波（ 1～ 20kHz） 自溶法－自身酶系 酶處理法－溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶 表面活性劑處理法－ SDS、去氧膽酸鈉、二乙基十六烷基溴 ? 反復(fù)冷凍法：將細(xì)胞或整塊組織置 20℃冰箱內(nèi)凍結(jié)，然后置室溫融化，如此反復(fù)兩次，大部分組織細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的顆?？蓛鋈谄扑椤? ? 超聲破碎法：利用超聲波機(jī)械振動(dòng)的原理使細(xì)胞破碎。常用于處理微生物和組織的細(xì)胞。 自溶法：利用組織和微生物的自身酶系統(tǒng)，在一定 PH和溫度下，使其細(xì)胞裂解。 ? 酶處理法：溶菌酶、蝸牛酶、纖維素酶等，在一定的條件下能消化細(xì)菌和組織細(xì)胞。 ? 表面活性劑處理法：常用十二烷基硫酸鈉等表面活性劑處理。 超速離心法： 差速離心法－低速和高速離心交替進(jìn)行 密度梯度離心法－區(qū)帶離心法 （二）可溶性抗原的純化 超速離心分離法 ? 常用于分離亞細(xì)胞成分及大分子蛋白。 ? 差速離心法：用于分離大小差異較大的抗原顆粒 ? 梯度密度離心法：區(qū)帶分離法，通過梯度密度離心，使各類分子量的顆粒分離。（梯度柱）。 選擇性沉淀法： 核酸去除法－氯化錳、硫酸魚精蛋白、鏈霉素 鹽析法
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