3第3章免疫原和抗血清的制備多媒體-文庫吧
2025-01-07 19:19 本頁面
【正文】 －硫酸銨、硫酸鈉 有機溶劑沉淀法－乙醇、丙酮 聚合物沉淀法－聚乙二醇 選擇沉淀法 ? 采用各種沉淀劑或某些條件促使抗原成分沉淀的方法。 ? 核酸去除法：可采用氯化錳、硫酸魚精蛋白等核酸提取沉淀劑，而核糖核酸降解法更簡單（采用 DNA或 RNA酶） ? 有機溶劑沉淀法：使用的有機溶劑多為乙醇或丙酮。 選擇沉淀法 ? 鹽析沉淀法 經典的蛋白質純化分離技術 抗原的初篩：用不同飽和度的硫酸鈉或硫酸銨使蛋白抗原進行初篩。 ? 提取丙種球蛋白 :（ IgG95%以上）將33%~50%飽和度硫酸胺沉淀物經去鹽后可直接用于抗體試劑。 ? 抗原的濃縮：通過加入硫酸銨，將其沉淀下來，以利于進一步純化。 離子交換層析法： 利用蛋白質帶電荷不同進行分離 離子交換劑： 離子交換纖維素、離子交換凝膠、離子交換樹脂 凝膠過濾法： 利用凝膠的分子篩作用，對分子量不同的蛋白質進行分離 凝膠過濾 ? 分子篩層析，具有三維空間 多孔網狀結構的物質。 ? 將含多種分子量的樣品溶液 緩慢流經凝膠柱時，各分子 在柱內進行兩種不同運動， 垂直向下移動和無定向擴散運動。 ? 通過凝膠分子篩作用，大、中、 小三類分子彼此較易分開。 離子交換層析 ? 離子交換層析是利用一些帶電離子集團的凝膠或纖維素，吸附帶有相反電荷的蛋白質抗原。 ? 具有離子交換集團的纖維素。 ? 具有離子交換集團的交聯(lián)葡萄糖、瓊脂糖和聚丙烯酰胺。 ? 被覆以離子化物質的細粉。 ? 凝膠合成的高度交聯(lián)樹脂 。 親和層析 ? 是利用生物大分子的生物學特異性，即生物分子間具有的專一性親和力的層析技術。 ? 在一定條件下，二者能緊密結合成復合物，如將復合物的已知一方固定在固相載體上，則可從溶液中專一性地分離和提純另一方。 親和層析法： 利用生物大分子之間具有的專一性親和力 (1)親和層析支持物的選擇： ①非特異性吸附低； ②液體流速快； ③在各種 pH和高濃度鹽溶液中穩(wěn)定； ④有合適豐富的化學基團，與蛋白質或其它化合物結 合； ⑤有豐富的微孔，以增加結合容量。 最常用的支持物是 Separose4B（瓊脂糖珠） (2)配體的選擇 條件： ①抗原或抗體必須單一特異性； ②抗原與抗體必須具有較高的親和力； ③配體必須有一個適當的化學基團。 親和層析 ? 抗原或抗體與支持物的結合 ? 將抗原或抗體結合到支持物上的方法達數十種，可歸納為載體結合法、物理吸附法、交聯(lián)法和網絡法。 ? 結合法的步驟是先活化支持物上的功能集團，抗原抗體連接到這些活化的集團上 。 (4)親和層析條件的選擇： ①封閉活性基團：用無關蛋白質或三乙醇胺過柱； ②除去未結合和結合不牢的蛋白：先用NaHCO3洗脫，再用解脫劑處理； 解脫劑： 3mol/L 硫氰酸鉀（或鈉）、 ? 制備菌體抗原的方法是 ? A 100℃ 加溫 2小時 B %甲醛 ? C 75%乙醇 D 1%氯化鈣 ? E 2％氯仿 ? 分離亞細胞成分最常用的方法是 ? A 凝膠過濾法 B 低速離心法 ? C 超速離心法 D 選擇性沉淀法 ? E 高速離心法 ? 配制綿羊紅細胞免疫原一般細胞濃度為 ? A 103∕ml B 104∕ml ? C 105∕ml D 106∕ml ? E 107∕ml ? 顆粒性抗原免疫接種的方法通常采用 ? A 皮下注射 B 淋巴結注射 ? C 肌肉注射 D 皮內注射 ? E 靜脈注射 免疫球蛋白片段的制備 ? 免疫球蛋白具有抗體活性，五類免疫球蛋白都能用純化的方法提取出來。 ? 將其分解成片段，如 Fab
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