基因工程大實(shí)驗(yàn)(已修改)
2025-01-15 17:38 本頁(yè)面
【正文】 基因工程及分子生物學(xué) 大實(shí)驗(yàn) 邢萬(wàn)金 蘇慧敏 內(nèi)蒙古大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物系 一、實(shí) 驗(yàn) 目 的 ? 學(xué)習(xí)基因操作的基本技術(shù) ? 熟悉基因克隆常規(guī)儀器的使用 ? 學(xué)習(xí)科研項(xiàng)目的開(kāi)題論證 ? 培養(yǎng)科學(xué)實(shí)驗(yàn)的獨(dú)立操作能力 ? 建立做好原始實(shí)驗(yàn)記錄的習(xí)慣 ? 練習(xí)撰寫研究論文 二、教 學(xué) 組 織 ? 學(xué)生自主設(shè)計(jì)方案 ? 教師審查方案可行 ? 學(xué)生獨(dú)立實(shí)驗(yàn)操作 ? 教師現(xiàn)場(chǎng)巡回指導(dǎo) ? 學(xué)生失敗互相救助 ? 教師把關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 三、實(shí) 驗(yàn) 內(nèi) 容 目的基因的亞克隆、表達(dá)載體的構(gòu)建、在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)。 1. 目 的 基 因 ? 納豆激酶成熟肽（ NK） （原核） 位于 pMD18TNK(full) ? 綠色熒光蛋白（ EGFP） （真核） 位于 pEGFPN1上 ? 紅色熒光蛋白（ DsRed2）（真核） 位于 pDsRed21上 ? 其它基因（教師在研課題） pMD18TNK(full): 納豆激酶全長(zhǎng) 1181bpDNA已插入 pMD18T 2. 載 體 ? pMD19T （ TA克?。? ? pUCmT （ TA克?。? ? pETTrx （融合表達(dá)） ? pGEX4T1 （融合表達(dá)） 克隆載體： 表達(dá)載體： pMD18/19T pUCmT pETTrx Amp PT7 RBS TRX(hispatch) CTC GAA GTT CTG TTT CAG GGT CCA GCA GGA TCC GCA GAA TTC AGC GCT AGC TAA CAT CAT CAT CAT CAT TAA GCTT Leu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro BamHI EcoRI NheI HindIII BamHI EcoRI NheI stop HindIII P3C cut site pGEX4T1 pGEX4T1
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