學(xué)習(xí)情境一細菌發(fā)酵制藥(已修改)
2025-01-08 23:17 本頁面
【正文】 LOGO 學(xué)習(xí)情境一 細菌發(fā)酵制藥 發(fā) 酵 制 藥 LOGO 子學(xué)習(xí)情境 天冬酰胺酶發(fā)酵 LOGO 天冬酰胺酶生產(chǎn)的工藝流程 LOGO 任務(wù) 1 菌種保藏 任務(wù) 2 菌種復(fù)壯 任務(wù) 3 種子擴大培養(yǎng) 任務(wù) 4 發(fā)酵罐的使用和維護 任務(wù) 5 發(fā)酵控制、分離純化及活性測定 子學(xué)習(xí)情境 1 天冬酰胺酶發(fā)酵 LOGO 任務(wù) 1 菌種保藏 LOGO 一、菌種保藏的目的 ? 保持菌種的存活率與優(yōu)良遺傳性狀 ； ? 防止菌種退化與污染 ? 使已經(jīng)退化的菌種恢復(fù)原有的性狀 總之，就是防止優(yōu)良遺傳性狀的喪失和菌種死亡。 LOGO 二、菌種保藏的原理 ? 挑選典型培養(yǎng)物（ typical culture）的優(yōu)良純種，并創(chuàng)造最有利于休眠的環(huán)境條件，使微生物處于代謝不活潑、生長受抑制的休眠狀態(tài)。 ? 菌種的保藏主要是依據(jù)微生物的生理、生化特性，人工創(chuàng)造條件使微生物代謝活動處于不活潑狀態(tài)。利用微生物的孢子、芽孢及營養(yǎng)體，給以不適合其萌發(fā)、生長、繁殖的條件，即低溫、干燥、缺氧、缺營養(yǎng)等手段來達到菌種保藏的目的。 LOGO 三、菌種的保藏方法 ? 斜面保藏法 ? 沙土保藏法 ? 冷凍真空干燥保藏法 ? 試管熔封保藏法 ? 礦油保存法 LOGO （一）斜面保藏法 ? 貼標簽：將注有菌株名稱和接種日期的標簽貼在試管斜面正上方。 ? 接種：將待藏菌種用些面接種法移種至標明菌名的相應(yīng)試管斜面上。 ? 培養(yǎng)：細菌置 37℃ 恒溫培養(yǎng) 15～ 24h，酵母菌置 28～ 30℃ 恒溫培養(yǎng) 36～ 60h，放線菌和絲狀真菌置 28℃ 培養(yǎng) 4～ 7d。 ? 收藏：為防止棉塞受潮長雜菌，管口棉花應(yīng)用牛皮紙包扎或用熔化的固體石蠟熔封棉塞后置 4℃ 冰箱保存。保存溫度不宜太低，否則會因結(jié)冰脫水而加速菌種的死亡。 斜面菌種 LOGO （二）沙土管或硅膠管保藏法 ? 處理沙土：取河沙經(jīng) 60目篩子過篩以除去大的顆粒，用 10%HCL浸泡（用量以浸沒沙面為度） 2～ 4h（或煮沸 30min）以除去有機質(zhì)，然后倒去鹽酸，用流水沖洗至中性，烘干或曬干備用。另取非耕作層瘦黃土（不含有機質(zhì)）風(fēng)干、粉碎，用 100～ 120目的篩子過篩備用。 ? 裝沙土管：將沙與土按 2： 1或 4： 1（ W/W）比例混合均勻，裝入試管（ 10mm 100 mm）中，裝置約 1cm高，加棉塞后用高壓蒸汽滅菌（ 121℃ 滅菌 30min）。滅菌后取少許置于牛肉膏蛋白胨或麥芽汁培養(yǎng)液中，在合適的溫度下培養(yǎng)一段時間確證無菌生長才能使用。 ? 制備菌液：吸 3ml無菌水至斜面菌種管內(nèi)，用接種環(huán)輕輕攪動，洗一下孢子制成孢子懸液。 ? 加孢子液：吸取上述孢子液 ～ ，加入量以濕潤沙土達 2/3高度為宜。 ? 干燥：將含菌的沙土管放入干燥器中，干燥器內(nèi)用培養(yǎng)皿盛 P2O5（或變色硅膠）做干燥劑，再用真空泵抽氣 2～ 4h以加速干燥。 ? 收藏：沙土管可選擇下列方法之一。⑴保藏于干燥器中。⑵將沙土管取出，管口用火焰熔封后保藏。⑶將沙土管裝入含 CaCl2等干燥劑的大試管內(nèi)，塞上橡皮塞并用蠟封管口，置于 4℃ 冰箱中保藏。 ? 恢復(fù)培養(yǎng)：使用時挑少量混有孢子的沙土接種于斜面培養(yǎng)基上即可。沙土管仍可原法繼續(xù)保藏。 LOGO （三）冷凍真空干燥保藏法 ? 分支管再與麥氏真空計和冷凝管相連。冷凝管的另一端連接在真空泵上。 ? 置冷凝管于盛有干冰（固體 CO2）的廣口保溫瓶中，使安瓿管中抽出的水汽進入冷凝管內(nèi)立刻凍結(jié)。 ? 將安瓿管的下半部也埋入干冰中，使管內(nèi)物質(zhì)驟然冷卻。約 10min，管內(nèi)物質(zhì)已全部凍結(jié)，開動真空泵30min后，將安瓿管移入 15℃ 的冰鹽水中，繼續(xù)開動真空泵抽氣 1h，然后將安瓿管置于室溫中，再抽氣30min。 ? 此時管內(nèi)物質(zhì)已全部干燥，樣品呈疏松狀。用微型煤氣燈在真空狀態(tài)下，熔封安瓿管的頸部。將制好的冷凍菌種管置于 4℃ 冰箱中保藏。 先將牛奶煮沸后冷卻，去掉上面的一層脂肪。反復(fù)三次后用脫脂棉過濾，或者將牛奶在 3000r/min的離心機中離心數(shù)分鐘，除去表面脂肪后，在 50kPa壓力下滅菌 30min。然后用牛奶洗下在斜面上長好的菌體，制成菌懸液，裝入安瓿管中約 ，塞上棉塞，用橡皮管將安瓿管連接在分支管上（見圖 11） 圖 11 冷凍干燥封管裝置簡圖 安瓿管 干冰容器 接真空計 接真空泵 冷凝管 LOGO （四）試管熔封（密封）保藏法 ? 試管熔封法的一般操作如下：
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