學(xué)習(xí)情境一細(xì)菌發(fā)酵制藥-全文預(yù)覽
【正文】 LOGO ? 滅菌完畢，先關(guān)閉各個(gè)小排汽閥，然后關(guān)閉放料閥，并按照“由近處到遠(yuǎn)處”依次關(guān)閉兩路管道上各個(gè)閥門。同時(shí)，啟動(dòng)攪拌，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為100r/min左右。 LOGO （三）培養(yǎng)基的實(shí)消 ? 培養(yǎng)基實(shí)消前，關(guān)閉進(jìn)空氣閥門并打開發(fā)酵罐的排氣閥，排出發(fā)酵罐內(nèi)空氣，使罐壓為 0，再次檢查并關(guān)閉發(fā)酵罐夾套的進(jìn)水閥門、發(fā)酵罐放料閥。 1） ℃ ，維持 30min，即可達(dá)到滅菌效果。 ? 空消時(shí)，先打開夾套的冷凝水排出閥，以便夾套中殘留的水排出，然后從兩路管道將蒸汽引入發(fā)酵罐：一路是發(fā)酵罐的通風(fēng)管，另一路是發(fā)酵罐的放料管。當(dāng)冷水溫度達(dá)到 10℃ 時(shí)，可供空氣預(yù)處理使用。 消泡方法： （ 1） 消泡劑：天然動(dòng)植物油、石油化工礦物油；改性油，表面活性劑（有機(jī)硅聚合物）； （ 2） 機(jī)械消泡： （ 3）改變培養(yǎng)基成分。培養(yǎng)基 pH值在發(fā)酵時(shí)要受菌體代謝的影響。 多數(shù)抗生素的接種量在 7%15%，有時(shí) 2025%。 ? 1 、 培養(yǎng)基 ? （ 1）培養(yǎng)基所用原料要經(jīng)過發(fā)酵試驗(yàn)合格才可使用； ? （ 2）嚴(yán)格控制滅菌后培養(yǎng)基的質(zhì)量； ? （ 3）斜面培養(yǎng)基使用前，需在適當(dāng)溫度下放置一定時(shí)間； ? （ 4）供生產(chǎn)用的孢子培養(yǎng)基要用比較單一的氮源，作為選種或分離用的培養(yǎng)基則采用較復(fù)雜的有機(jī)氮源。 ? 茄子瓶 → 種子罐 → 發(fā)酵罐 LOGO 確定種子罐級(jí)數(shù)需注意的問題 ? 種子級(jí)數(shù)越少越好，可簡(jiǎn)化工藝和控制，減少染菌機(jī)會(huì) ? 種子級(jí)數(shù)太少，接種量小，發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng)，降低發(fā)酵罐的生產(chǎn)率，增加染菌機(jī)會(huì) ? 雖然種子罐級(jí)數(shù)隨產(chǎn)物的品種及生產(chǎn)規(guī)模而定。16%玉米漿，接種量 1%一 %， 37℃ 溫度，通氣攪拌培養(yǎng) 4～ 8h。細(xì)菌菌體培養(yǎng)時(shí)間一般為 1~2天，產(chǎn)芽孢的細(xì)菌培養(yǎng)則需要5~10天。這些純種培養(yǎng)物稱為種子。初、復(fù)篩都需以正常生產(chǎn)菌種作對(duì)照，復(fù)篩出的菌株產(chǎn)量應(yīng)比對(duì)照菌株提高 5%以上，并經(jīng)糖、氨代謝檢驗(yàn)，合格后在生產(chǎn)罐上試驗(yàn)。 ? 初篩。 ? 平板分離。實(shí)際上是利用自發(fā)突變（正變）不斷地從生產(chǎn)中選種。 ? 衰退的原因：①基因突變，②分離現(xiàn)象。 ? 密封法保藏法 ? 將需保藏菌種按無菌操作要求接種至固體培養(yǎng)基（細(xì)菌采用肉湯瓊脂、酵母采用蔡氏培養(yǎng)基、放線菌采用高氏１號(hào)培養(yǎng)基）上，經(jīng)適溫培養(yǎng)后，（細(xì)菌１～２ d，孢芽菌、放線菌５～７ d，酵母菌３ d）塞緊棉花塞，放在干燥器內(nèi)，干燥器密封處涂上凡士林。 先將牛奶煮沸后冷卻，去掉上面的一層脂肪。約 10min，管內(nèi)物質(zhì)已全部?jī)鼋Y(jié)，開動(dòng)真空泵30min后，將安瓿管移入 15℃ 的冰鹽水中，繼續(xù)開動(dòng)真空泵抽氣 1h，然后將安瓿管置于室溫中，再抽氣30min。 LOGO （三）冷凍真空干燥保藏法 ? 分支管再與麥?zhǔn)险婵沼?jì)和冷凝管相連。⑵將沙土管取出，管口用火焰熔封后保藏。 ? 加孢子液：吸取上述孢子液 ～ ，加入量以濕潤(rùn)沙土達(dá) 2/3高度為宜。另取非耕作層瘦黃土（不含有機(jī)質(zhì)）風(fēng)干、粉碎，用 100～ 120目的篩子過篩備用。 ? 培養(yǎng)：細(xì)菌置 37℃ 恒溫培養(yǎng) 15～ 24h，酵母菌置 28～ 30℃ 恒溫培養(yǎng) 36～ 60h，放線菌和絲狀真菌置 28℃ 培養(yǎng) 4～ 7d。 ? 菌種的保藏主要是依據(jù)微生物的生理、生化特性，人工創(chuàng)造條件使微生物代謝活動(dòng)處于不活潑狀態(tài)。 LOGO 二、菌種保藏的原理 ? 挑選典型培養(yǎng)物（ typical culture）的優(yōu)良純種，并創(chuàng)造最有利于休眠的環(huán)境條件，使微生物處于代謝不活潑、生長(zhǎng)受抑制的休眠狀態(tài)。 ? 接種：將待藏菌種用些面接種法移種至標(biāo)明菌名的相應(yīng)試管斜面上。 斜面菌種 LOGO （二）沙土管或硅膠管保藏法 ? 處理沙土：取河沙經(jīng) 60目篩子過篩以除去大的顆粒，用 10%HCL浸泡（用量以浸沒沙面為度） 2～ 4h（或煮沸 30min）以除去有機(jī)質(zhì)，然后倒去鹽酸，用流水沖洗至中性，烘干或曬干備用。 ? 制備菌液：吸 3ml無菌水至斜面菌種管內(nèi)，用接種環(huán)輕輕攪動(dòng)，洗一下孢子制成孢子懸液。⑴保藏于干燥器中。沙土管仍可原法繼續(xù)保藏。 ? 將安瓿管的下半部也埋入干冰中，使管內(nèi)物質(zhì)驟然冷卻。將制好的冷凍菌種管置于 4℃ 冰箱中保藏。 ? 使用時(shí)，用砂輪在管口劃一圈，并在乙醇燈下火焰滅菌后敲開管口即可轉(zhuǎn)接到另一斜面上，由于試管經(jīng)熔封后，可防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，又可減緩細(xì)菌的代謝速度，并能防止雜菌污染。 LOGO 表 11 菌種保藏各種方法比較表 LOGO 表 12微生物菌種制備、保藏和使用記錄表 LOGO 表 13 菌種接收記錄表 LOGO
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