學(xué)習(xí)情境一細菌發(fā)酵制藥(存儲版)
【正文】 LOGO 二、提取、沉淀、熱處理 ? 每千克菌體干粉加人 液 lOL， 37℃ 保溫攪拌 。沉淀用、 ，在無菌條件下用 6號垂熔漏斗過濾，分裝，冷凍干燥制得注射用 L天冬酰胺酶成品，每支 1萬單位或 2萬單位。mol氨的酶量定義為一個活力單位。在2～ 5℃ 放置 4～ 5d，離心得沉淀。每次使用后，先切斷電源，排除壓力后，停止供水，并將蒸汽發(fā)生器內(nèi)的水排空。 LOGO （八）折疊膜過濾芯的維護 ? 折疊膜過濾芯，其鎖扣、外筒、端蓋以及密封膠圈雖然都是熱穩(wěn)定材料，但耐高溫有一定限度。清洗完畢，利用空氣壓力排出洗水，并用空氣吹干發(fā)酵罐。 ? 流加控制 流加時，在火焰區(qū)域內(nèi)揭開不銹鋼插針的包扎，并將插針迅速插穿流加孔的硅膠塞，同時，將硅膠罐裝入蠕動泵的擠壓輪中，啟動蠕動泵，積壓輪轉(zhuǎn)動可以將流加液壓進發(fā)酵罐。最后，關(guān)閉夾套冷凝水排除閥，打開夾套進冷卻水閥門以及夾套出水閥，進冷卻水降溫，這時，啟動冷卻水降溫自動控制，當(dāng)溫度降低至設(shè)定值機自動停止進水。然后，擰開接種孔的不銹鋼塞，將配制好的培養(yǎng)基從接種孔倒入發(fā)酵罐。兩路蒸汽都進入發(fā)酵罐后，適當(dāng)打開所有能夠排汽的閥門充分排汽，如管路上的小排汽閥、取樣閥、發(fā)酵罐的排氣閥等，以便消除滅菌的死角。 LOGO 任務(wù) 4 發(fā)酵罐的使用和維護 LOGO 一、發(fā)酵罐的結(jié)構(gòu) 空氣預(yù)處理器 電動閥 電磁流量計 空氣預(yù)濾器 空氣精濾器 蒸汽過濾器 pH 電極 電動閥（夾套進冷水） 電動閥（夾套進熱水） 通風(fēng)管 1消沫電極 1消沫器 1攪拌器 1檢測溫度的電熱偶 1 DO電極 16擋板 17電機 1減速器 1接種孔 出水閥 2夾套 2冷凝水排除閥 2取樣與放料閥（三向閥門） 圖 16 100L全自動實驗罐結(jié)構(gòu)示意圖 LOGO 二、發(fā)酵罐的使用 ? （一）空氣過濾器的滅菌操作 ? 滅菌前的準(zhǔn)備 ? 啟動蒸汽發(fā)生器 將自來水引入水處理裝置進行除雜、軟化處理，處理后留入貯水灌，然后開啟自動控制開關(guān)進行加熱，蒸汽壓力達到 。 溫度： 溫度直接影響生長和酶的合成； 最適溫度 。如改變種子罐的培養(yǎng)條件，加速了孢子發(fā)芽及菌體的繁殖，也可相應(yīng)地減少種子罐的級數(shù)。普通牛肉培養(yǎng)基，接種后于 37℃ 培養(yǎng) 24h。將復(fù)篩后得到的高單位菌株制成沙土管、冷凍管或用其他方法保藏。 ? 純培養(yǎng)。 ? 菌種的復(fù)壯（ rejuvenation）：使衰退的菌種恢復(fù)原來優(yōu)良性狀。然后用牛奶洗下在斜面上長好的菌體，制成菌懸液，裝入安瓿管中約 ，塞上棉塞，用橡皮管將安瓿管連接在分支管上（見圖 11） 圖 11 冷凍干燥封管裝置簡圖 安瓿管 干冰容器 接真空計 接真空泵 冷凝管 LOGO （四）試管熔封（密封）保藏法 ? 試管熔封法的一般操作如下： ? 用各種瓊脂斜面（普通肉湯等）常規(guī)滅菌后，經(jīng)接種，室溫培養(yǎng) 24～48小時后，將接種菌生長旺盛的試管用噴燈將其管口熔封，分別置室溫和冰箱下保存。 ? 置冷凝管于盛有干冰（固體 CO2）的廣口保溫瓶中，使安瓿管中抽出的水汽進入冷凝管內(nèi)立刻凍結(jié)。 ? 收藏：沙土管可選擇下列方法之一。保存溫度不宜太低，否則會因結(jié)冰脫水而加速菌種的死亡。LOGO 學(xué)習(xí)情境一 細菌發(fā)酵制藥 發(fā) 酵 制 藥 LOGO 子學(xué)習(xí)情境 天冬酰胺酶發(fā)酵 LOGO 天冬酰胺酶生產(chǎn)的工藝流程 LOGO 任務(wù) 1 菌種保藏 任務(wù) 2 菌種復(fù)壯 任務(wù) 3 種子擴大培養(yǎng) 任務(wù) 4 發(fā)酵罐的使用和維護 任務(wù) 5 發(fā)酵控制、分離純化及活性測定 子學(xué)習(xí)情境 1 天冬酰胺酶發(fā)酵 LOGO 任務(wù) 1 菌種保藏 LOGO 一、菌種保藏的目的 ? 保持菌種的存活率與優(yōu)良遺傳性狀 ； ? 防止菌種退化與污染 ? 使已經(jīng)退化的菌種恢復(fù)原有的性狀 總之，就是防止優(yōu)良遺傳性狀的喪失和菌種死亡。 ? 收藏：為防止棉塞受潮長雜菌，管口棉花應(yīng)用牛皮紙包扎或用熔化的固體石蠟熔封棉塞后置 4℃ 冰箱保存。 ? 干燥：將含菌的沙土管放入干燥器中，干燥器內(nèi)用培養(yǎng)皿盛 P2O5（或變色硅膠）做干燥劑，再用真空泵抽氣 2～ 4h以加速干燥。冷凝管的另一端連接在真空泵上。反復(fù)三次后用脫脂棉過濾，或者將牛奶在 3000r/min的離心機中離心數(shù)分鐘，除去表面脂肪后，在 50kPa壓力下滅菌 30min。 ? 常見的衰退現(xiàn)象：①菌落和細胞形態(tài)的改變；②生長速度緩慢，產(chǎn)孢子越來越少；③抵抗力、抗不良環(huán)境能力減弱等；④代謝產(chǎn)物生
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