【正文】 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 第 8章 藥物制劑的微生物學(xué)檢查 （瓊脂擴(kuò)散法和系列稀釋法）， 了解藥物的體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)。 ，熟悉特殊藥品的 無(wú)菌檢查法。 ，熟悉藥品的大腸桿菌 檢查方法。 、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和破 傷風(fēng)桿菌的檢查方法 。 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 第 1節(jié) 藥物的抗菌試驗(yàn) 藥物的體外抗菌試驗(yàn)包括用于區(qū)別藥物是抑菌或殺菌藥物的 抑菌試驗(yàn) ；測(cè)定藥物殺菌活性的 殺菌試驗(yàn) ；以及檢查兩種藥物聯(lián)合作用的 聯(lián)合抗菌試驗(yàn) 等。一般抑菌藥物只能抑制微生物生長(zhǎng)，不能殺死微生物，抑菌藥物被除去，微生物又可以恢復(fù)繼續(xù)生長(zhǎng)。殺菌藥物能殺死微生物，殺菌藥物除去后，微生物仍然不能生長(zhǎng)。 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 藥物的抑菌作用或殺菌作用是在一定條件下相對(duì)而言的。在我們檢測(cè)時(shí)，藥物的作用受到用藥時(shí)培養(yǎng)基的組成、溫度、 PH值及所用的菌種、菌量等各個(gè)因素有關(guān)。 雖然說(shuō)體外抗菌試驗(yàn)有很多優(yōu)點(diǎn)，但是由于體外抗菌試驗(yàn)沒(méi)有復(fù)雜的體內(nèi)因素影響，因此藥物體外抗菌試驗(yàn)和體內(nèi)抗菌試驗(yàn)可能會(huì)出現(xiàn)不一致的結(jié)果。所以，一般我們?cè)隗w外對(duì)藥物進(jìn)行測(cè)試后，有效的藥再要進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)，如果體內(nèi)試驗(yàn)再次證實(shí)此藥有效的話(huà)，才能推薦應(yīng)用到臨床。 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 第一節(jié) 藥物的體外抑菌試驗(yàn) 一、藥物的體外抑菌試驗(yàn) （一）體外抑菌試驗(yàn) 藥物的體外抑菌試驗(yàn)是常用抗菌試驗(yàn)方法，其中最常用的方法用系列稀釋法和瓊脂擴(kuò)散法。 稀釋法 稀釋法有液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法和固體稀釋法（斜面法）兩種。這兩種方法都可以用來(lái)測(cè)定藥物的最小抑菌濃度（ MIC）： 是指該藥物能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度，通常用 μg∕ml 或 U/ml表示。 具體的液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法見(jiàn)書(shū)本（ P138圖 81），固體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法 ， 又可分為 平板法 和 斜面法。 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 2. 利用藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散，并在一定濃度范圍內(nèi)抑制細(xì)菌 生長(zhǎng)的原理進(jìn)行的。一般用于細(xì)菌和酵母菌的藥敏試驗(yàn)。 1. 濾紙片法（紙碟法） 濾紙片法是最常用的方法，適用于新藥的初篩試驗(yàn)（初步藥物是否有抗菌作用）及臨床的藥敏試驗(yàn)（細(xì)菌藥物第三性試驗(yàn)、以便選擇用藥）。濾紙片分濕、干兩種，可以在試驗(yàn)時(shí)用無(wú)菌紙片沾取藥物溶液放在含菌的平板表面，也以預(yù)先做成一定濃度的干燥紙片。一般來(lái)說(shuō)預(yù)先做成的干燥紙片實(shí)用一些而且準(zhǔn)確一些。 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 至于干燥紙片的制備方法：選用吸水力強(qiáng)而且質(zhì)地均勻的濾紙，用打洞機(jī)制成 6mm直徑的圓紙片， 120℃ 干燥滅菌 2小時(shí)。然后把配制好的各種適宜濃度的抗生素溶液，每100張紙片加入 ，使它均勻浸潤(rùn)，放在無(wú)菌平皿中， 37℃ ，使它干燥，分裝小瓶中，封口， 4℃ 保存。如果是 β － 內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素還要放在 20℃ 保存。這就制成了干燥的含藥液的紙片。 一般藥敏試驗(yàn)常采用濾紙片法，我們可以根據(jù)抑菌圈的大小，來(lái)判斷菌種對(duì)藥物的敏感性，是敏感，中度敏感還是耐藥。 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 世界衛(wèi)生組織規(guī)定了抗菌藥物的敏感性評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件下根據(jù)抑菌圈大小來(lái)判斷，比如： 抗生素或化療藥物 抑菌圈直徑（ mm） 耐藥 中敏 敏感 氯霉素 ≤12 13 17 ≥18 紅霉素 ≤13 14 17 ≥18 四環(huán)素 ≤14 15 18 ≥19 卡那霉素 ≤13 14 17 ≥18 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 1. 打洞法 在含菌瓊脂平板上打洞（一般打 6個(gè)孔， 4個(gè)小孔加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，另外 2個(gè)小孔加血清樣品，放在 37℃ ， 1218小時(shí)，測(cè)定其抑菌圈直徑。所以說(shuō)微量法適于藥物血濃度的監(jiān)測(cè)。優(yōu)點(diǎn)是微量（血清用量少）敏感，操作簡(jiǎn)便。 除此之外還有管碟法 、 直接滴加法和挖溝法：適用于 測(cè)試一種藥物對(duì)幾種細(xì)菌的抗菌作用 。 方法是先制備普通瓊脂平板 ， 并在平板上挖直溝 ， 在溝內(nèi)滴加藥液 ， 在溝側(cè)接種細(xì)菌 。 經(jīng)過(guò)培養(yǎng)以后觀察家細(xì)菌生長(zhǎng)的情況 。 我們可以根據(jù)溝和細(xì)菌間的抑菌距離的長(zhǎng)短 ， 來(lái)判斷該藥物對(duì)這些細(xì)菌的抗菌能力 。 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 一）、 體外 殺菌試驗(yàn) 殺菌試驗(yàn)是用來(lái)評(píng)價(jià)藥物對(duì)微生物的致死活性的。 1. 最低殺菌濃度（ MBC）（ 最小致死濃度MLC） 的測(cè)定 按液體培養(yǎng)基稀釋法的操作方法測(cè)了藥物的 MIC。然后把未長(zhǎng)出菌的各個(gè)試管培養(yǎng)液分別移種到無(wú)菌平板上，培養(yǎng)后凡是平板上無(wú)菌生長(zhǎng)的藥物最低濃度就是最小致死濃度（ MLC）。 如果是細(xì)菌的話(huà)可以稱(chēng)為最小殺菌濃度（ MBC）。 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 1. 活菌計(jì)數(shù)法 將定量的試驗(yàn)菌加入到一定濃度的定量藥物中，作用一定時(shí)間后，取樣進(jìn)行活菌數(shù)計(jì)數(shù)，從存活的微生物數(shù)量計(jì)算出藥物對(duì)試驗(yàn)菌的致死率，從而判斷藥物的殺菌能力。 活菌計(jì)數(shù)一般是將定量的藥物與試驗(yàn)菌作用后混合液稀釋后，混入瓊脂培養(yǎng)基做成平板，培養(yǎng)后數(shù)平板上形成的菌落數(shù)，由于一個(gè)菌落是由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的，所以可以用菌數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，計(jì)算出混合液中存活的細(xì)菌數(shù)?；蛘咭部梢杂梦⒖诪V膜過(guò)濾藥物與試驗(yàn)菌的混合液，洗凈藥液，將濾膜放在平板上培養(yǎng)后數(shù)菌落數(shù)。 遼陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥微生物 微生物與藥學(xué) 1. 酚系數(shù)測(cè)定（石炭酸系數(shù)測(cè)定） 酚系數(shù)是以酚為標(biāo)準(zhǔn)，將待測(cè)的化學(xué)消毒劑與殺菌效力相比較，所得的就是殺菌效力的比值。 由于各種化學(xué)消毒劑殺菌原理各不相同，因而這種方法僅僅適用于酚類(lèi)消毒劑殺菌效力的測(cè)定。 具體的測(cè)定方法說(shuō)是分別將酚及待測(cè)化學(xué)消毒劑按不同比例稀釋?zhuān)魅?5ml放到試管中，再加入經(jīng) 24小時(shí)培養(yǎng)后的菌懸液各 ， 混勻后放入 20℃ 水浴中， 15分鐘分別取一接種環(huán)混合液移種到另