【正文】 藥物遺傳毒性和致癌性研究現(xiàn)狀和動向 2023/1/16 1 常 艷 國家上海新藥安全評價研究中心 藥物遺傳毒性評價的指導(dǎo)原則 1 遺傳毒性試驗方法的研究 2 藥物致癌性評價的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌試驗的研究 4 4 主要內(nèi)容 遺傳毒性評價的指導(dǎo)原則 SFDA 中國國家食品藥品監(jiān)督管理局 ICH 人用藥物注冊技術(shù)規(guī)定國際協(xié)調(diào)組織 OECD 經(jīng)濟合作發(fā)展組織 EMEA 歐洲藥品評價局 US FDA 美國藥監(jiān)局 US EPA 美國環(huán)境保護署 MHLW 日本厚生勞動省 其他世界性的政府法規(guī)部門 藥物研發(fā)監(jiān)管的主要藥政實體 OECD、 EPA可供參考的遺傳毒性指導(dǎo)原則 遺傳毒性試驗的指導(dǎo)原則 SFDA 體外： 2項試驗 ? 細菌回復(fù)突變試驗（ Ames） —— Required ? 染色體畸變試驗（ CA） OR ? 小鼠淋巴瘤細胞 tk基因突變試驗（ MLA） ? 體內(nèi)： 1項試驗 ? 微核試驗（ MN） —— Required 《藥物遺傳毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》 ZH GPT 21, 2023 等同于 ICH S2B ICH S2A+S2B FDARedbook Redbook 2023: ShortTerm Tests for Geic Toxicity July 2023 Redbook 2023: Bacterial Reverse Mutation Test Redbook 2023: In vitro Mammalian Chromosomal Aberration Test Redbook 2023: Mouse Lymphoma Thymidine Kinase Gene Mutation Assay Redbook 2023: Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test FDACDER FDACDER EMEA EMEA EMEA Step 2 Step 1 Step 3 Step 4 2023 2023 2023 2023~2011 ? ICH SC 同意啟動修訂工作 ? 2023. 10 ICH EWG 討論籌劃修訂方法 ? 2023. 05 對修訂內(nèi)容達成一致意見，開始起草S2(R1) ? 2023. 10 完成起草的 S2(R1) ? 2023. 02 簽署 S2(R1)，完成step 2 ? 2023. 06 審議意見，回答公共注釋 ? 2023. 11 未按期開會（未獲得彗星試驗數(shù)據(jù)） ? ? 體內(nèi)試驗單次和重復(fù)給藥方案都接受 ? FDA對 取消體外細胞試驗或降低最高濃度和細胞毒性 提出異議 ? S2(R1)正式頒布 遺傳毒性標(biāo)準(zhǔn)組合試驗的修訂 2023~2011 ICH S2A+S2B=S2(R1) S2R1 的修訂宗旨： ?減少體外哺乳動物細胞試驗的假陽性 ?動物試驗 3R原則（替代、減少和優(yōu)化） In vivo： 建議整合入重復(fù)給藥毒性實驗中 每次實驗不必使用平行的陽性對照 應(yīng)用流式細胞儀檢測 ICH S2A+S2B=S2(R1) 遺傳毒性標(biāo)準(zhǔn)組合試驗的修訂 S2B S2R1 選擇一 選擇二 細菌回復(fù)突變試驗 （ with repeat） 細菌回復(fù)突變試驗 （ No repeat） 細菌回復(fù)突變試驗 （ No repeat） 體外哺乳動物細胞試驗： CA / MLA 10mM Cell growth:?50% / RTG: ? 80% 體外哺乳動物細胞試驗： CA / MLA / MN 1mM ≤50%/ ≥80% 無 體外哺乳動物細胞試驗 體內(nèi)微核試驗 （單獨一項且是急性毒性試驗） 體內(nèi)微核試驗 （整合至一般毒理試驗中） 一項體內(nèi)微核試驗 + 一項體內(nèi)不同檢測終點 /組織試驗（肝 Comet試驗） （整合至一般毒理試驗中或聯(lián)合在同一個試驗） 整合試驗的最高劑量和暴露 ICH S2(R1)修訂小結(jié) S2A和 S2B整合入一個指導(dǎo)原則中； 提供可選擇的遺傳毒性試驗組合； 減少 體外哺乳動物細胞試驗不相關(guān)的陽性； 體內(nèi)遺傳毒性試驗可以 整合 入重復(fù)給藥毒性試驗中； 無需每一項體內(nèi)試驗都設(shè)同步的陽性對照； 體外細菌突變試驗無需重復(fù)試驗。 ICH S2(R1) Pfuhler S. et al. 2023 藥物遺傳毒性評價的指導(dǎo)原則 1 遺傳毒性試驗方法的研究 2 藥物致癌性評價的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌試驗的研究 4 4 主要內(nèi)容 遺傳毒性傳統(tǒng)試驗方法 3 1 細菌回復(fù)突變試驗（ Ames試驗） 人工誘變的突變株在組 /色氨酸操縱子中有一個突變，突變的菌株必須依賴外源性組 /色氨酸才能生長，而在無組 /色氨酸的選擇性培養(yǎng)基上不能存活，致突變物可使其基因發(fā)生回復(fù)突變，使它在缺乏組 /色氨酸的培養(yǎng)基上也能生長。 野生型 （原養(yǎng)型） 突變型 （缺陷型） Ames試驗 ?測試系統(tǒng)：細菌 鼠傷寒沙門氏菌：組氨酸營養(yǎng)缺陷型 埃希氏大腸桿菌：色氨酸營養(yǎng)缺陷型 ?菌株特性鑒定 菌株 組 /色氨酸突變 缺失 可檢測的 突變類型 修復(fù) LPS VIT 質(zhì)粒 TA 1535 G46 urvB rfa bio 堿基置換 TA 1537 C3076 urvB rfa bio 移碼 TA97 D6610 urvB rfa bio pKM101 移碼 TA 98 D3052 urvB rfa bio pKM101 移碼 TA 100 G46 urvB rfa bio pKM101 堿基置換 TA 102 G428 urvB+ rfa bio pKM101 堿基置換 WP2uvrA tryp E uvrA pKM101 堿基置換 Ames試驗 Ames試驗 濃度設(shè)置 ?陰性對照組 /溶劑對照組； ?受試物至少五個劑量組； ?陽性對照組； Ames試驗 方法 平板摻入法： mL受試菌液； mL受試物、溶劑對照或陽性物溶液； mL磷酸鈉緩沖液 /S9混合液； mL融溶的頂層瓊脂 （ ％瓊脂、 ％ NaCl、 mM生物素 和 －組胺酸 ） 混合后，鋪于底層瓊脂上，室溫凝固。 Ames試驗 預(yù)培養(yǎng)法 將下列物質(zhì)在冰浴上混合： mL S9混合液或 mL磷酸緩沖液 （大約 10^8菌量） mL受試物溶液（或?qū)φ?，溶劑和陽性對照物溶液? 將該混合液在 37℃ 下培養(yǎng) 20分鐘（水浴中） 然后加入 2