【正文】 human) Size of tk gene: 11 kb with 5 introns tk locus mutation: tk+ tk allele caused by T G transversion at position 489 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)（ MLA） 基本原理 Target cell： Mouse lymphoma L5178Y tk +/ cell line ( . Mutat Res, 1977 ) L5178Y3 cell line （ tk +/+ ） EMS treatment cell line （ tk +/ ） cell line （ tk / ） Spontaneous reverse mutation (selected by THMG medium) MLA 基本原理 TK +/ cells (TFT sensitive THMG resistant) TK / cells (TFT resistant THMG sensitive) Mutagen treatment TK +/ cells (L5178Y, TK6, WTK1) treated by chemicals, and then selected by TFT (trifluorothymidine) The growing colony — TFT resistant ( TK / ) mutant MLA 基本原理 培養(yǎng)基 不含馬血清的 RPMI1640培養(yǎng)基 含 10%馬血清的 RPMI1640培養(yǎng)基 含 20%馬血清的 RPMI1640培養(yǎng)基 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)（ MLA） 受試物處理時(shí)間 TK基因突變?cè)囼?yàn)中，要使用短時(shí)處理 (3～ 4小時(shí) )方式。 ? 微孔平板（ microwell method） （即 96孔培養(yǎng)板）法在歐洲使用較多。 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)（ MLA） 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗(yàn)（ MLA） 試驗(yàn)結(jié)果的判定 ? 各處理組的 MF值呈 濃度依賴性升高 ，判定為陽(yáng)性； ? MF值 ≥陰性對(duì)照值 +126， 判定為陽(yáng)性。 基本原理 體內(nèi) Piga基因突變?cè)囼?yàn) 體內(nèi) Piga基因突變?cè)囼?yàn) 體內(nèi) Piga基因突變?cè)囼?yàn) 藥物遺傳毒性評(píng)價(jià)的指導(dǎo)原則 1 遺傳毒性試驗(yàn)方法的研究 2 藥物致癌性評(píng)價(jià)的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌試驗(yàn)的研究 4 4 主要內(nèi)容 藥物致癌性評(píng)價(jià)的概要 藥物致癌性試驗(yàn)的指導(dǎo)原則 2. ICH 指導(dǎo)原則 S1A：藥物致癌試驗(yàn)的必要性 S1B：藥物致癌試驗(yàn) S1C：藥物只要試驗(yàn)的劑量選擇 S1C(R)：藥物致癌試驗(yàn)劑量選擇的附件 1. SFDA指導(dǎo)原則（國(guó)食藥監(jiān)注 [2023]129號(hào)） 《 藥物致癌試驗(yàn)必要性的技術(shù)指導(dǎo)原則 》 Technical guidance on the need for carcinogenicity studies for pharmaceuticals （等同于 ICH S1A） 藥物致癌性評(píng)價(jià)的概要 致癌性試驗(yàn)指南 藥物致癌性評(píng)價(jià)的概要 ICH S1A 和 SFDA指導(dǎo)原則 致癌試驗(yàn)要求 持續(xù)使用 6個(gè)月以上的藥物或頻繁、周期性、間歇性使用的藥物； 如果有致癌傾向，一些短期使用藥物也要做致癌試驗(yàn)， 某些劑型或輸藥系統(tǒng)會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)藥物長(zhǎng)期暴露的 時(shí)間窗要求 批準(zhǔn)上市 之前要做致癌試驗(yàn)； 一些特殊關(guān)注的群體（如嬰幼兒）則需要在批準(zhǔn)（ IV期臨床）前做 用于嚴(yán)重甚至威脅生命的疾病的藥物可以在臨床批準(zhǔn)（ IV期臨床） 后做（沒(méi)滿意的可替代療法；特定人群如腫瘤病人較短的生存期； 視適應(yīng)癥不同等情況而定） 藥物致癌性評(píng)價(jià)的概要 以下情況不需要致癌試驗(yàn) 明確的基因型致癌物 假定此類藥物具有跨種屬致癌性 經(jīng)眼睛用藥和皮膚用藥 藥物無(wú)明顯的結(jié)構(gòu)警示和全身暴露 藥物經(jīng)過(guò)鹽、酸或某些治療性基因改變 改變之前的試驗(yàn)數(shù)據(jù)已存在 改變后的 PK、 PD和毒性沒(méi)有明顯改變 用于治療危及生命的疾病或患者存活期較短（ ＜ 23年） 生物制劑（蛋白療法）通常不要求致癌試驗(yàn) — case by case（ ICH S6） ICH S1A 和 SFDA指導(dǎo)原則 遺傳毒性和致癌性的相關(guān)性 1. 基因型與非基因型致癌物的致癌性 2. Ames陽(yáng)性的致突變劑中， 80%具有致癌性 3. 由 2年動(dòng)物致癌試驗(yàn)證實(shí)呈陽(yáng)性的致癌物中， 50%具有遺傳毒性 Correlation is not perfect! 2. 藥物體外遺傳毒性試驗(yàn)的陽(yáng)性率偏高 (Snyder et al. –Mutat Res. 2023, 488: 15169) 25%上市藥物具有遺傳毒性結(jié)果 在體外染色體損傷試驗(yàn)中證實(shí)陽(yáng)性的藥物，在致癌試驗(yàn)中大部分呈陰性 在體外染色體損傷試驗(yàn)中，高于治療濃度的藥物呈陽(yáng)性，通常與細(xì)胞毒性有關(guān) 3. 藥物的遺傳毒性和致癌性不完全相符的其他原因 體內(nèi)組織修復(fù)功能 適應(yīng)性反應(yīng) 遺傳多態(tài)性 器官及系統(tǒng)之間相互作用等因素 遺傳毒性和致癌性的相關(guān)性 藥物遺傳毒性評(píng)價(jià)的指導(dǎo)原則 1 遺傳毒性試驗(yàn)方法的研究 2 藥物致癌性評(píng)價(jià)的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌性試驗(yàn)的研究 4 4 主要內(nèi)容 致癌性試驗(yàn)研究 先導(dǎo)物研發(fā) 靶點(diǎn)篩選 候選物篩選 I 期臨床 III期臨床 II期臨床 IV期臨床 傳統(tǒng)兩年嚙齒類動(dòng)物致癌試驗(yàn) 起始于上世紀(jì) 60年代，首先用于檢測(cè)工業(yè)化學(xué)物質(zhì)的致癌性 現(xiàn)用于檢測(cè)大多數(shù)慢性藥物的致癌性 非傳統(tǒng)嚙齒類動(dòng)物致癌試驗(yàn) – 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 1997年開(kāi)始用于檢測(cè)新藥的致癌性（ ICH S1B） 目前尚未用于首要和工業(yè)化合物的致癌性檢測(cè) GLP致癌性研究 ? 大鼠 ? 小鼠 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗(yàn) 嚙齒類每個(gè)品系都有其病變背景并容易自發(fā)腫瘤，因此背景數(shù)據(jù)和經(jīng)驗(yàn)非常重要。因而， FDA認(rèn)為該模型僅適宜評(píng)價(jià)遺傳毒性的化合物。 如果可行的話，確認(rèn)腫瘤的原發(fā)部位 將腫瘤歸類為“致命”與“非致命”： 有沒(méi)有可能是腫瘤促成的動(dòng)物提前死亡或死亡 要求專業(yè)判斷 要求做 Peto試驗(yàn) 計(jì)劃處死的動(dòng)物不需要 記錄計(jì)劃處死前解剖的動(dòng)物死亡或?yàn)l死的原因 顯微評(píng)價(jià) 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗(yàn) 致癌性實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)化合物在動(dòng)物體內(nèi)潛在致癌性的特定的非臨床安全性評(píng)價(jià)，旨在增進(jìn)人類的潛在致癌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià) 致癌性試驗(yàn)開(kāi)展時(shí)間取決于藥物的類型和關(guān)注程度 通常在臨床試驗(yàn)第二，三階段進(jìn)行，很少在第 IV階段（上市后）進(jìn)行 通常 104周的生物評(píng)價(jià)采用大鼠或小鼠進(jìn)行 使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或敏感的體外試驗(yàn)來(lái)推進(jìn)致癌性試驗(yàn) 一些藥物可能不需要進(jìn)行致癌性試驗(yàn) 細(xì)胞毒性抗癌藥物一般不需要進(jìn)行致癌性試驗(yàn) 生物技術(shù)藥物也可除外（ ICH