【正文】 human) Size of tk gene: 11 kb with 5 introns tk locus mutation: tk+ tk allele caused by T G transversion at position 489 小鼠淋巴瘤細胞試驗（ MLA） 基本原理 Target cell： Mouse lymphoma L5178Y tk +/ cell line ( . Mutat Res, 1977 ) L5178Y3 cell line （ tk +/+ ） EMS treatment cell line （ tk +/ ） cell line （ tk / ） Spontaneous reverse mutation (selected by THMG medium) MLA 基本原理 TK +/ cells (TFT sensitive THMG resistant) TK / cells (TFT resistant THMG sensitive) Mutagen treatment TK +/ cells (L5178Y, TK6, WTK1) treated by chemicals, and then selected by TFT (trifluorothymidine) The growing colony — TFT resistant ( TK / ) mutant MLA 基本原理 培養(yǎng)基 不含馬血清的 RPMI1640培養(yǎng)基 含 10%馬血清的 RPMI1640培養(yǎng)基 含 20%馬血清的 RPMI1640培養(yǎng)基 小鼠淋巴瘤細胞試驗（ MLA） 受試物處理時間 TK基因突變試驗中，要使用短時處理 (3～ 4小時 )方式。 ? 微孔平板（ microwell method） （即 96孔培養(yǎng)板）法在歐洲使用較多。 小鼠淋巴瘤細胞試驗（ MLA） 小鼠淋巴瘤細胞試驗（ MLA） 試驗結(jié)果的判定 ? 各處理組的 MF值呈 濃度依賴性升高 ，判定為陽性； ? MF值 ≥陰性對照值 +126， 判定為陽性。 基本原理 體內(nèi) Piga基因突變試驗 體內(nèi) Piga基因突變試驗 體內(nèi) Piga基因突變試驗 藥物遺傳毒性評價的指導原則 1 遺傳毒性試驗方法的研究 2 藥物致癌性評價的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌試驗的研究 4 4 主要內(nèi)容 藥物致癌性評價的概要 藥物致癌性試驗的指導原則 2. ICH 指導原則 S1A：藥物致癌試驗的必要性 S1B：藥物致癌試驗 S1C：藥物只要試驗的劑量選擇 S1C(R)：藥物致癌試驗劑量選擇的附件 1. SFDA指導原則（國食藥監(jiān)注 [2023]129號） 《 藥物致癌試驗必要性的技術(shù)指導原則 》 Technical guidance on the need for carcinogenicity studies for pharmaceuticals （等同于 ICH S1A） 藥物致癌性評價的概要 致癌性試驗指南 藥物致癌性評價的概要 ICH S1A 和 SFDA指導原則 致癌試驗要求 持續(xù)使用 6個月以上的藥物或頻繁、周期性、間歇性使用的藥物； 如果有致癌傾向，一些短期使用藥物也要做致癌試驗， 某些劑型或輸藥系統(tǒng)會導致體內(nèi)藥物長期暴露的 時間窗要求 批準上市 之前要做致癌試驗； 一些特殊關(guān)注的群體（如嬰幼兒）則需要在批準（ IV期臨床）前做 用于嚴重甚至威脅生命的疾病的藥物可以在臨床批準（ IV期臨床） 后做（沒滿意的可替代療法；特定人群如腫瘤病人較短的生存期； 視適應癥不同等情況而定） 藥物致癌性評價的概要 以下情況不需要致癌試驗 明確的基因型致癌物 假定此類藥物具有跨種屬致癌性 經(jīng)眼睛用藥和皮膚用藥 藥物無明顯的結(jié)構(gòu)警示和全身暴露 藥物經(jīng)過鹽、酸或某些治療性基因改變 改變之前的試驗數(shù)據(jù)已存在 改變后的 PK、 PD和毒性沒有明顯改變 用于治療危及生命的疾病或患者存活期較短（ ＜ 23年） 生物制劑（蛋白療法）通常不要求致癌試驗 — case by case（ ICH S6） ICH S1A 和 SFDA指導原則 遺傳毒性和致癌性的相關(guān)性 1. 基因型與非基因型致癌物的致癌性 2. Ames陽性的致突變劑中， 80%具有致癌性 3. 由 2年動物致癌試驗證實呈陽性的致癌物中， 50%具有遺傳毒性 Correlation is not perfect! 2. 藥物體外遺傳毒性試驗的陽性率偏高 (Snyder et al. –Mutat Res. 2023, 488: 15169) 25%上市藥物具有遺傳毒性結(jié)果 在體外染色體損傷試驗中證實陽性的藥物，在致癌試驗中大部分呈陰性 在體外染色體損傷試驗中，高于治療濃度的藥物呈陽性，通常與細胞毒性有關(guān) 3. 藥物的遺傳毒性和致癌性不完全相符的其他原因 體內(nèi)組織修復功能 適應性反應 遺傳多態(tài)性 器官及系統(tǒng)之間相互作用等因素 遺傳毒性和致癌性的相關(guān)性 藥物遺傳毒性評價的指導原則 1 遺傳毒性試驗方法的研究 2 藥物致癌性評價的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌性試驗的研究 4 4 主要內(nèi)容 致癌性試驗研究 先導物研發(fā) 靶點篩選 候選物篩選 I 期臨床 III期臨床 II期臨床 IV期臨床 傳統(tǒng)兩年嚙齒類動物致癌試驗 起始于上世紀 60年代，首先用于檢測工業(yè)化學物質(zhì)的致癌性 現(xiàn)用于檢測大多數(shù)慢性藥物的致癌性 非傳統(tǒng)嚙齒類動物致癌試驗 – 轉(zhuǎn)基因動物 1997年開始用于檢測新藥的致癌性（ ICH S1B） 目前尚未用于首要和工業(yè)化合物的致癌性檢測 GLP致癌性研究 ? 大鼠 ? 小鼠 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗 嚙齒類每個品系都有其病變背景并容易自發(fā)腫瘤，因此背景數(shù)據(jù)和經(jīng)驗非常重要。因而， FDA認為該模型僅適宜評價遺傳毒性的化合物。 如果可行的話，確認腫瘤的原發(fā)部位 將腫瘤歸類為“致命”與“非致命”： 有沒有可能是腫瘤促成的動物提前死亡或死亡 要求專業(yè)判斷 要求做 Peto試驗 計劃處死的動物不需要 記錄計劃處死前解剖的動物死亡或瀕死的原因 顯微評價 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗 致癌性實驗是評價化合物在動物體內(nèi)潛在致癌性的特定的非臨床安全性評價，旨在增進人類的潛在致癌風險評價 致癌性試驗開展時間取決于藥物的類型和關(guān)注程度 通常在臨床試驗第二，三階段進行，很少在第 IV階段（上市后）進行 通常 104周的生物評價采用大鼠或小鼠進行 使用轉(zhuǎn)基因動物或敏感的體外試驗來推進致癌性試驗 一些藥物可能不需要進行致癌性試驗 細胞毒性抗癌藥物一般不需要進行致癌性試驗 生物技術(shù)藥物也可除外（ ICH