【正文】 . . . . .現(xiàn)代分子生物學習題及答案一、填空題1． 基因工程是70年代發(fā)展起來的遺傳學的一個分支學科。2． 基因工程的兩個基本特點是： (1)分子水平上的操作，(2)細胞水平上的表達3． 基因克隆中三個基本要點是：克隆基因的類型；受體的選擇；載體的選擇4． 通過比較用不同組合的限制性內(nèi)切核酸酶處理某一特定基因區(qū)域所得到的不同大小 的片段，可以構建顯示該區(qū)域各限制性內(nèi)切核酸酶切點相互位置的限制性酶切圖譜。5． 限制性內(nèi)切核酸酶是按屬名和種名相結合的原則命名的，第一個大寫字母取自屬名的第一個字母，第二、三兩個字母取自_種名的前兩個字母，第四個字母則用株名表示。6．部分酶切可采取的措施有：(1)減少酶量；(2)縮短反應時間；(3)增大反應體積等。7．第一個分離的限制性內(nèi)切核酸酶是EcoK；而第一個用于構建重組體的限制性內(nèi)切核酸酶是_ EcoRl。8．限制性內(nèi)切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的來源不同，但識別的序列都是GGCC，它們屬于異源同工酶。9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_枯草桿菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得到的分子量為76kDa的大片段，具有兩種酶活性： (1) 539。339。合成酶的活性； (2) 339。539。外切核酸酶的活性。10．為了防止DNA的自身環(huán)化，可用堿性磷酸酶去雙鏈DNA_5’端的磷酸基團。11．EGTA是_Ca2+_離子螯合劑。12．測序酶是修飾了的T7 DNA聚合酶，它只有_ 539。339。合成酶的活性，而沒有339。539。外切酶的活性。13．切口移位(nick translation)法標記DNA的基本原理在于利用DNA聚合酶I的__539。一339。外切核酸酶和539。一339。合成酶的作用。14．欲將某一具有突出單鏈末端的雙鏈DNA分子轉(zhuǎn)變成平末端的雙鏈形式，通?？刹捎胈___ S1核酸酶切割或DNA聚合酶補平。15．反轉(zhuǎn)錄酶除了催化DNA的合成外，還具有__核酸水解酶H的作用，可以將DNA RNA雜種雙鏈中的_RNA_水解掉。16．基因工程中有3種主要類型的載體：質(zhì)粒DNA，病毒DNA，質(zhì)粒和病毒DNA雜合體。17．就克隆一個基因(DNA片段)來說，最簡單的質(zhì)粒載體也必需包括三個部分：__復制區(qū)： 含有復制起點；選擇標記： 主要是抗性基因；克隆位點： 便于外源DNA的插入。另外，一個理想的質(zhì)粒載體必須具有低分子量。 18． 一個帶有質(zhì)粒的細菌在有EB的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后，一部分細胞中已測 不出質(zhì)粒，這種現(xiàn)象叫 質(zhì)粒消除(或治愈) 。19． pBR322是一種改造型的質(zhì)粒，它的復制子來源于pMBl ，它的四環(huán)素抗性基 因來自于pSCl01，它的氨芐青霉素抗性基因來自于pSF2124(R質(zhì)粒)。20．YAC的最大容載能力是1000kb，BAC載體的最大容載能力是 300kb 。21．pSCl01是一種 嚴緊 復制的質(zhì)粒。22．pUCl8質(zhì)粒是目前使用較為廣泛的載體。pUC系列的載體是通過pBR322和M13 兩種質(zhì)粒改造而來。它的復制子來自 pMBl ，Amp 抗性基因則是來自 轉(zhuǎn)座子。23．噬菌體之所以被選為基因工程載體，主要有兩方面的原因：一是它在細菌中能夠大量繁殖，這樣有利于外源DNA的擴增； 二是對某些噬菌體(如l噬菌)的遺傳結構和功能研究得比較清楚，其大腸桿菌宿主系統(tǒng)的遺傳也研究得比較詳盡。24． 野生型的M13不適合用作基因工程載體，主要原因是沒有合適的限制性內(nèi)切核酸酶識別位點和 選擇標記。25． 黏粒(cosmid)是質(zhì)?！删w雜合載體，它的復制子來自質(zhì)粒、COS位點序列來自 l噬菌體，最大的克隆片段達到45 kb。26． 野生型的l噬菌體DNA不宜作為基因工程載體，原因是：(1) 分子量大，(2)酶的多切點，(3)無選擇標記27．噬菌粒是由質(zhì)粒和噬菌體DNA共同構成的，其中來自質(zhì)粒的主要結構是復制區(qū)，而來自噬菌體的主要結構是 IG區(qū) 。28．l噬菌體載體由于受到包裝的限制，插入外源DNA片段后，總的長度應在噬菌體基 因組的 75％～105％ 的范圍內(nèi)。29． 在分離DNA時要使用金屬離子螯合劑，如EDTA和檸檬酸鈉等，其目的是 螯合Mg2+離子，抑制核酸酶的活性 。30． 用乙醇沉淀DNA時，通常要在DNA溶液中加人單價的陽離子，如NaCl和NaAc， 其目的是 中和DNA分子的負電荷，增加DNA分子間的凝聚力。31． 引物在基因工程中至少有4個方面的用途：(1)合成探針；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反應；(4)進行序列分析32．Clark發(fā)現(xiàn)用Taq DNA聚合酶得到的PCR反應產(chǎn)物不是平末端，而是有一個突出 堿基末端的雙鏈DNA分子。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)設計了克隆PCR產(chǎn)物的T—載體。33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在 第二鏈合成時形成的發(fā)夾環(huán) 34．乙醇沉淀DNA的原理是乙醇使DNA分子脫水。35． 假定克隆一個編碼某種蛋白質(zhì)的基因，必須考慮其表達的三個基本條件： (1)保持正確的可讀框 (2)能夠使其轉(zhuǎn)錄的啟動子 (3)具有翻譯的起始和終止信號36． 受體細胞的感受態(tài)是接受外源DNA的生理狀態(tài)_。37． DNA重組連接的方法大致分為四種：(1)黏性末端連接； (2)平末端連接；(3)同聚物接尾連接；(4)接頭連接法。38． 將含有外源基因組一個酶切片段的質(zhì)粒稱之為含有一個基因組DNA克隆_，各種此類質(zhì)粒的集合體稱之為構建了一個基因組DNA文庫。39．將含有一個mRNA的DNA拷貝的克隆稱作一個_cDNA克隆，源于同一批RNA制備物的克隆群則構建了一個_ cDNA文庫_。40．只要知道基因組中某一特定區(qū)域的部分核苷酸組成，用_聚合酶鏈式反應(PCR)可以將這段DNA進行百萬倍的擴增。41．人工感受態(tài)的大腸桿菌細胞在溫度為0176。C 時吸附DNA, 42176。C _時攝人DNA。42．目前，在重組體的篩選中，已經(jīng)發(fā)展了許多構思巧妙、具有極高準確性的篩選方法。 大致可以分為：(1)遺傳學方法；(2)物理篩選法；(3)核酸雜交法；(4)表達產(chǎn)物分析法等。43．PCR擴增篩選重組體是比較簡便的篩選方法，它適合于_插入外源片段的種類較多，大小又極為相似的重組體的篩選。44． 核酸雜交探針可分為兩大類： DNA探針和RNA探針。其中DNA探針又分為___基因組DNA探針和cDNA 探針。45．如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生5’突出的黏性末端，則可以用_ Klenow酶填補的方法_進行3’末端標記。如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割DNA產(chǎn)生的是3’突出的黏性末端，可以用__ T4DNA聚合酶進行3’末端標記。46．單鏈DNA探針的標記可以采用下列方法：(1)用M13噬菌體載體合成單鏈DNA探針；(2)從mRNA反轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA探針；(3)用不對稱PCR合成單鏈DNA探針。47．根據(jù)Northern雜交的結果可以說明：外源基因是否進行了轉(zhuǎn)錄_。48．差示雜交(differential hybridization)技術需要__兩種不同的細胞群體能夠表達不同的基因，即在一個群體中能夠表達一些基因，而在另一個細胞群體中不能表達這些基因。49．RNA分子經(jīng)凝膠電泳后按大小不同分開，然后被轉(zhuǎn)移到一張硝酸纖維素膜(尼龍膜) 上，同一放射DNA探針雜交的技術稱__ Northern印跡_。50．在__ Southern印跡_技術中，DNA限制性片段經(jīng)凝膠電泳分離后，被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(或尼龍膜)上，然后與放射性的DNA探針雜交。51．可用T4 DNA聚合酶進行平末端的DNA標記，因為這種酶具有__5’174。3’合成酶_和_3’ 174。5’外切核酸酶_的活性。52．根據(jù)外源片段提供的遺傳表型篩選重組體，必需考慮三種因素：(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表達載體；(3)不含內(nèi)含子。53．Northern印跡和Southern印跡有兩點根本的區(qū)別： (1)印跡的對象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)電泳條件不同，前者是變性條件，后者是非變性條件。54．放射免疫篩選的原理基于以下三點：(1)抗體能夠被吸附到固體支持物上；(2)同一個抗原可以同幾種抗體結合； (3)抗體能夠被標記二、選擇題(單選或多選)1． 因研究重組DNA技術而獲得諾貝爾獎的科學家是( ) (a)A．Kornberg (b)W．Gilbert (c)P．Berg (d)B．McClintock2． 第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83． 關于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有( )不太恰當。 (a)由作用于同一DNA序列的兩種酶構成 (b)這一系統(tǒng)中的核酸酶都是Ⅱ類限制性內(nèi)切核酸酶 (c)這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對DNA進行修飾 (d)不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制修飾系統(tǒng)4．Ⅱ型限制性內(nèi)切核酸酶： ( ) (a)有內(nèi)切核酸酶和甲基化酶活性且經(jīng)常識別回文序列 (b)僅有內(nèi)切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供 (c)限制性識別非甲基化的核苷酸序列 (d)有外切核酸酶和甲基化酶活性 (e)僅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供5．下面有關限制酶的敘述哪些是正確的?( ) (a)限制酶是外切酶而不是內(nèi)切酶 (b)限制酶在特異序列(識別位點)對DNA進行切割 (c)同一種限制酶切割DNA時留下的末端序列總是相同的 (d)一些限制酶在識別位點內(nèi)稍有不同的點切割雙鏈DNA，產(chǎn)生黏末端 (e)一些限制酶在識別位點內(nèi)相同的位置切割雙鏈DNA，產(chǎn)生平末端6．第一個被分離的Ⅱ類酶是： ( ) (a)EcoK (b)HindⅢ (c)HindⅡ (d)EcoB7．在下列進行DNA部分酶切的條件中，控制那一項最好?( ) (a)反應時間 (b)酶量 (c)反應體積 (d)酶反應的溫度8．在下列試劑中，那一種可以螯合Ca2+離子?( ) (a)EDTA (b)檸檬酸鈉 (c)SDS (d)EGTA9．在下列工具酶中，那一種可以被EGTA抑制活性?( ) (a)S1單鏈核酸酶 (b)末端轉(zhuǎn)移酶 (c)堿性磷酸酶 (d)Bal 31核酸酶10．限制性內(nèi)切核酸酶可以特異性地識別： ( ) (a)雙鏈DNA的特定堿基對 (b)雙鏈DNA的特定堿基序列 (c)特定的三聯(lián)密碼 (d)以上都正確11．下列關于限制性內(nèi)切核酸酶的表示方法中，正確一項的是( )。 (a)Sau3A I (b)E．coRI (c)hind III (d)Sau 3A112．限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性是指：( )(a)在非常規(guī)條件下，識別和切割序列發(fā)生變化的活性。 (b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快 (d)識別序列與原來的完全不同13．下面哪一種不是產(chǎn)生星號活性的主要原因?( ) (a)甘油含量過高 (b)反應體系中含有有機溶劑 (c)含有非Mg2+的二價陽離子 (d)酶切反應時酶濃度過低14．關于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有( )不太恰當 (a)由作用于同一DNA序列的兩種酶構成 (b)這一系統(tǒng)中的核酸酶都是Ⅱ類限制性內(nèi)切核酸酶 (c)這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對DNA進行修飾 (d)不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制修飾系統(tǒng)15．在長模板鏈的指導下引物延伸合成長的DNA互補鏈時應選用( ) (a)T4DNA聚合酶 (b)Klenow酶． (c)大腸桿菌DNA聚合酶I (d)T7DNA聚合酶16．末端轉(zhuǎn)移酶是合成酶類，( ) (a)作用時不需要模板 (b)在Ca2+的存在下，可以在突出的3，末端延長DNA鏈 (c)在Ca2+的存在下，可以在隱蔽的3，末端延長DNA鏈(d)上述說法有兩種是正確的17．在基因工程中，可用堿性磷酸酶( ) (a)防止DNA的自身環(huán)化 (b)同多核苷酸激酶一起進行DNA的5，末端標記 (c)制備突出的3，末端 (d)上述說法都正確18．下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性 (a)λ核酸外切酶 (b)外切酶Ⅲ (c)單核苷酸激酶 (d)堿性磷酸酶19． 下列哪一種酶作用時需要引物? ( ) (a)限制酶 (b)末端轉(zhuǎn)移酶 (c)反轉(zhuǎn)錄酶 (d)DNA連接酶20．S1核酸酶的功能是( ) (a)切割雙鏈的DNA (b)切割單鏈的RNA (c)切割發(fā)夾環(huán) (d)以上有兩項是正確的21．Klenow酶與DNA聚合酶相比，前者喪失了( )的活性。 (a)5，3，合成酶， (b)3，5，外切酶 (c)5，3，外切酶 (d)轉(zhuǎn)移酶22． 下面關于