【正文】 目 錄第一章 瘧原蟲生活史一、概述二、人體內(nèi)發(fā)育三、蚊體內(nèi)的發(fā)育第二章 瘧原蟲鏡下形態(tài)一、薄血膜中瘧原蟲形態(tài)二、厚血膜中瘧原蟲形態(tài)第三章 顯微鏡使用及維護一、顯微鏡的構造二、顯微鏡使用 三、使用注意事項四、顯微鏡的維護保養(yǎng)第四章 血片制作與染色一、血片制作二、血膜的染色第五章 瘧原蟲鏡檢技術一、血液二、血液中各種正常細胞形態(tài)三、薄血膜鏡檢四、厚血膜鏡檢五、雜質與瘧原蟲的鑒別六、瘧原蟲計數(shù)附錄：瘧原蟲圖譜40第一章 瘧原蟲生活史一、概述瘧原蟲是瘧疾的病原體。瘧原蟲為單細胞真核生物，屬原生動物亞界頂端復合物門、孢子綱、真球蟲目、瘧原蟲科、瘧原蟲屬。人體瘧原蟲有4種：間日瘧原蟲（Plasmodium vivax）、惡性瘧原蟲()、三日瘧原蟲()和卵形瘧原蟲()，依次引起間日瘧、惡性瘧、三日瘧和卵形瘧。在我國間日瘧較常見，惡性瘧次之，但對人體危害較間日瘧嚴重，三日瘧偶爾發(fā)現(xiàn)，卵形瘧已無病例報告。4種人體瘧原蟲的生物學特征見表11。瘧原蟲的發(fā)育和繁殖，必須通過脊椎動物與昆蟲媒介兩個宿主，人體瘧原蟲的宿主是人和按蚊。瘧原蟲在人體分別寄生于肝實質細胞和血液中的紅細胞內(nèi)，在蚊體內(nèi)則寄生于蚊胃，最后積聚于唾腺。4種人體瘧原蟲的生活史基本相同，包括在人體內(nèi)的紅細胞外期和紅細胞內(nèi)期以及在蚊體內(nèi)的配子生殖和孢子增殖兩個階段。二、人體內(nèi)發(fā)育瘧原蟲在人體內(nèi)的發(fā)育分成肝細胞內(nèi)的發(fā)育和紅細胞內(nèi)的發(fā)育兩個階段。（一） 紅細胞外期按蚊吸人血時，按蚊唾腺中的子孢子隨唾液進入人體的末梢血液中，在30分鐘內(nèi)，隨血流進入肝臟，在肝實質細胞內(nèi)發(fā)育，進行裂體增殖，此時期稱紅細胞外期（簡稱紅外期）或肝細胞期（簡稱肝期），此時期的瘧原蟲稱肝期裂殖體。成熟肝期裂殖體直徑為45～60mm，內(nèi)含數(shù)以萬計的肝期裂殖子。肝期裂殖體成熟致使肝細胞破裂，肝期裂殖子釋入血液。不同種瘧原蟲的此期所需時間不同，從6～12天不等。間日瘧原蟲的紅外期裂體增殖較為復雜。目前認為間日瘧原蟲的子孢子在遺傳學上具有兩種不同的類型，即速發(fā)型子孢子和遲發(fā)型子孢子。速發(fā)型子孢子侵入肝細胞后，遂開始紅外期裂體增殖，釋放出肝期裂殖子侵入紅細胞，經(jīng)裂體增殖引起臨床發(fā)作。遲發(fā)型子孢子侵入肝細胞后暫不繼續(xù)發(fā)育，處于休眠狀態(tài)（休眠體），經(jīng)過一段休眠期后，再發(fā)育成為成熟的紅外期裂殖體，釋放出肝期裂殖子侵入紅細胞引起復發(fā)。惡性瘧原蟲和三日瘧原蟲無遲發(fā)型子孢子，因而惡性瘧和三日瘧也無復發(fā)現(xiàn)象（二）紅細胞內(nèi)期 紅外期裂殖子從肝細胞釋放出來進入血液后，一部分被吞噬細胞消滅，一部分在數(shù)分鐘后侵入紅細胞并開始發(fā)育，進行裂體增殖，這個時期稱為紅細胞內(nèi)期(簡稱紅內(nèi)期)。裂殖子進入紅細胞后，其細胞質內(nèi)出現(xiàn)一個較大的空泡，最初為圓形，細胞質少，圍繞著空泡，細胞核在蟲體的一側，頗似戒指的寶石，發(fā)育成早期滋養(yǎng)體（亦稱環(huán)狀體）。以后逐漸發(fā)育，蟲體和細胞核都漸漸增大，細胞質增多，并分解血紅蛋白產(chǎn)生瘧色素，其色澤、形狀有種的差別，此時的瘧原蟲稱為晚期滋養(yǎng)體（亦稱大滋養(yǎng)體），因其細胞質向外伸出不規(guī)則的偽足，能呈阿米巴樣運動，也稱為阿米巴樣體。惡性瘧原蟲的環(huán)狀體，在外周血液中經(jīng)十幾個小時的發(fā)育，逐漸隱匿在微血管、血竇或其他血流緩慢處，發(fā)育成大滋養(yǎng)體及裂殖體，因此在外周血液中很難看到這兩個時期。瘧原蟲由小滋養(yǎng)體發(fā)育成大滋養(yǎng)體的時間間日瘧約須810個小時，惡性瘧原蟲10余個小時。大滋養(yǎng)體發(fā)育成熟后蟲體變圓，胞質內(nèi)的空泡消失，核開始分裂，逐漸發(fā)育成為成熟裂殖體。成熟裂殖體的每個核被一份胞質包繞，核的數(shù)量因不同蟲種而異，一般為8～32個，稱為裂殖子。裂殖體成熟后，被寄生的紅細胞破裂，釋放出裂殖子。破裂的紅細胞碎片、裂殖子和瘧色素等進入血液，引起瘧疾臨床發(fā)作。一部分裂殖子被巨噬細胞吞食，一部分裂殖子再侵入正常紅細胞，開始新一輪的紅內(nèi)期發(fā)育，如此循環(huán)往復，稱為裂體增殖周期。紅內(nèi)期發(fā)育成熟的時間，因不同蟲種而異，間日瘧原蟲和卵形瘧原蟲為48小時，惡性瘧原蟲為24~38小時，三日瘧原蟲為72小時，產(chǎn)生相應的間日發(fā)熱和三日發(fā)熱等不同發(fā)熱周期。紅細胞內(nèi)的瘧原蟲經(jīng)過數(shù)次裂體增殖后，部分侵入紅細胞的裂殖子不再進行核分裂，而逐漸發(fā)育成為雌、雄配子體，或稱大、小配子體，這是瘧原蟲有性生殖的開始。成熟的雌、雄配子體被雌性按蚊吸入后，便在蚊胃內(nèi)進行有性生殖。瘧原蟲的生活史參見圖11。三、蚊體內(nèi)的發(fā)育在按蚊叮吸攜帶有雌、雄配子體的人血時，紅內(nèi)期瘧原蟲進入蚊胃，但只有雌、雄配子體能在蚊體內(nèi)發(fā)育和繁殖，其余各期均被消化。雌、雄配子體在蚊體內(nèi)的發(fā)育和繁殖，包括配子生殖和孢子增殖兩個期。（一）配子生殖在蚊胃內(nèi)，雌配子體的核經(jīng)過減數(shù)分裂，形成圓形不活動的雌配子。雄配子體的核分裂成4～8個，細胞漿伸出鞭毛狀細絲，每1細胞核進入一條鞭毛狀細絲內(nèi)，形成雄配子。雄配子游近雌配子，雌、雄配子結合形成圓形的合子，并進一步發(fā)育成長形能蠕動的動合子。動合子穿過蚊胃壁的上皮細胞，停留于上皮細胞和彈性纖維膜之間，發(fā)育成卵囊。此時約為吸血后的第24～72小時。（二）孢子增殖在卵囊內(nèi)核反復分裂，形成許多梭狀子孢子。蚊胃壁上的卵囊可有數(shù)個到數(shù)十個或上百個，一個發(fā)育成熟的卵囊內(nèi)可有1 000到10 000個子孢子。瘧原蟲在蚊體內(nèi)發(fā)育時間的長短與溫度和濕度有關，室溫24℃～26℃，相對濕度75％～80％，是蚊體內(nèi)瘧原蟲孢子生殖最適宜的條件。氣溫低于16℃或高于30℃時，發(fā)育變慢，并退化變性，直至死亡。成熟子孢子通過卵囊的微孔逸出或卵囊破裂后擴散入血腔，最后聚集于唾腺內(nèi)。當含子孢子的雌蚊吸血時，子孢子隨唾液進入人體，瘧原蟲開始其在人體內(nèi)的發(fā)育過程。表1 4種人體瘧原蟲的生物學特征惡性瘧原蟲間日瘧原蟲卵形瘧原蟲三日瘧原蟲紅外期發(fā)育天數(shù)5891415休眠體無有有無紅外期裂殖子數(shù)30000100001500015000裂體增殖周期（小時）3648484872寄生的紅細胞特征幼紅細胞Duffy陽性網(wǎng)織紅細胞和幼紅細胞網(wǎng)織紅細胞和幼紅細胞正常紅細胞紅細胞脹大無明顯脹大略脹大無紅細胞斑點茂氏點薛氏點薛氏點齊氏點瘧色素黃褐色棕黃色棕黃色深褐色紅內(nèi)期裂殖子數(shù)8261224612612配子體新月/臘腸形圓形圓形圓形蚊內(nèi)發(fā)育天數(shù)108912141415卵囊內(nèi)瘧色素鏈狀和條狀皇冠羽毛狀交叉線聚集于邊緣圖11瘧原蟲的生活史第二章 瘧原蟲鏡下形態(tài)采患者的血液制作涂片并染色后，可以在顯微鏡下觀察到瘧原蟲形態(tài)。常用的血涂片有兩種：一種是借推片將血液薄薄地涂在載玻片上，使每個紅細胞平鋪在玻片上，稱薄血膜，因薄血膜血液干燥快，原蟲形態(tài)極少變形，多用于以觀察瘧原蟲形態(tài)與鑒別蟲種；另一種是把較多的血液涂成圓形，血膜中血細胞重疊，原蟲較為集中，稱為厚血膜。厚血膜涂布面積小，陽性檢出率高，厚血膜的鏡檢效率比薄血膜約高六倍?，F(xiàn)常用的一張載玻片上同時做厚薄血膜各一，厚血膜用來檢查，薄血膜供編號和鑒別蟲種用。一、薄血膜中瘧原蟲形態(tài)薄血膜涂制均勻時瘧原蟲著色良好，結構清晰，便于觀察形態(tài)和鑒別蟲種。薄血膜上各種紅內(nèi)期瘧原蟲的形態(tài)，見表21和圖21核被寄生的紅細胞胞漿空泡 薛氏小點瘧色素核 表21 四種瘧原蟲薄血膜形態(tài)鑒別(吉氏染色)間日瘧原蟲惡性瘧原蟲三日瘧原蟲卵形瘧原蟲被寄生紅細胞大小形狀脹大正常正?；蚩s小正常或稍脹大，卵圓形或邊緣呈傘矢狀顏色褪色正?；蛏宰险Ｍ噬唿c薛氏點出現(xiàn)稍晚，紅色，細小數(shù)多茂氏點紅色，粗大數(shù)少齊氏點淡紅色，微細薛氏點出現(xiàn)較早粗大，數(shù)多小滋養(yǎng)體大小較大，約占紅細胞直徑的1/ 3