藥品檢驗用菌種的傳代和保藏(已修改)
2025-06-07 18:20 本頁面
【正文】 藥品微生物檢驗用菌種的傳代和保藏 浙江省藥品檢驗所 葉銘龍 2 菌種的定義及其與各應用領域的關系 ? 菌種泛指從自然界獲取的各種微生物的不同的種。 ? 醫(yī)學領域研究菌種主要考慮其致病機理 ? 工業(yè)生產(chǎn)研究菌種主要考慮其發(fā)酵機理 ? 藥品微生物檢驗主要考慮其標準性 3 標準菌種的概念及其管理 ? 標準菌種是指由國家授權機構(gòu)制備的具有穩(wěn)定的生物學特性并用妥善方法保藏的菌種。 ? 我國的標準菌種統(tǒng)一由 中國菌種保藏管理委員會 （ CCCCM） 管理， 涉及藥品微生物檢驗的菌種由 醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心 （ CMCC） 提供 4 標準菌種的保藏形式 我國提供的標準菌種通常是以 凍干粉 的形式包裝于熔封的 厚玻璃容器 中 。 在這種容器中 ， 微生物通常與賦形劑共存 ，由于缺乏生長必須的環(huán)境條件 ， 一般 呈休眠狀態(tài) 。 5 純培養(yǎng) 所謂微生物的純培養(yǎng)是指在一個微生物的菌落形成單位中，所有的微生物細胞或孢子都屬于生物學的同一個種。嚴格地說， 純培養(yǎng)是在培養(yǎng)基上由一個細胞或孢子分裂、繁殖而產(chǎn)生的后代 。在該細胞或孢子的生長過程種，不受其他微生物的侵犯， 不會在培養(yǎng)物中產(chǎn)生另外微生物種的后代，在整個生長過程中不發(fā)生變異或死亡。 6 獲取純培養(yǎng)的工作環(huán)境 潔凈工作室：環(huán)境潔凈度 10000級下的局部 100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)，全過程必須無菌操作， 防止微生物污染 。 無菌隔離艙 7 獲取純培養(yǎng)的接種工具 接種環(huán) 接種針 接種鏟 接種鉤 其他玻璃器械 8 獲取純培養(yǎng)的其他器具 玻璃器皿：如各種規(guī)格培養(yǎng)皿。 微生物實驗室常用的設備，如高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱等 9 獲取純培養(yǎng)的主要技術－移植（又稱接種） 微生物的移植（或稱接種）是指將微生物接種在培養(yǎng)基上的操作。 10 移植（又稱接種）的兩種方式－劃線 和穿刺 劃線法是指用接種工具將微生物細胞移植在固體培養(yǎng)基斜面或平板上的一種方法 。 穿刺法是指用接種工具將微生物細胞移植到固體或半固體培養(yǎng)基內(nèi)的一種方法。 11 影響集菌培養(yǎng)效果的若干因素 ? 溫度 ? 滲透壓 ? 氧氣 ? 光 ? pH值和氧化還原電位 ? 培養(yǎng)基 ? 抗生素 12 驗證純培養(yǎng)的主要依據(jù) 用顯微鏡觀察時，全部的生物個體是相似的，如果是細菌，對革蘭氏染色反應應當是一致的。 將培養(yǎng)物制成懸液，重新傾注平板，或平板劃線培養(yǎng)后，所形成的全部菌落的形態(tài)應該是相似的。如果是細菌，將重新形成的菌落各作穿刺培養(yǎng)，其培養(yǎng)特征應當是一致的。 從重新分離的各菌落作生理特征觀測時，如對氮源的利用，對糖類的發(fā)酵或同化以及其他生理生化的測定，應呈現(xiàn)出一致性。 13 定期移植保藏法 一般步驟為： 將菌種接種在所要求的培養(yǎng)基上，置最適溫度下集菌培養(yǎng)。得到健壯的菌體（如有性孢子、無性孢子或細胞等）后，放于溫度較低、干燥處保藏，并且每隔一定時間重新移植培養(yǎng)一次。 14 定期移植保藏法 細菌置 4～ 6℃ 保藏，芽孢桿菌每
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