劉寶dna甲基化ppt課件(已修改)
2025-05-24 02:48 本頁(yè)面
【正文】 表觀遺傳學(xué)創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)5’氮胞苷處理水稻幼苗對(duì)基因組 DNA甲基化的影響 龐勁松 劉寶 東北師范大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心v 表觀遺傳學(xué)與 DNA甲基化v DNA甲基化作用? DNA的甲基化及其方式? DNA甲基化的生物學(xué)意義? DNA胞嘧啶甲基化的種類和形成v DNA胞嘧啶甲基化檢測(cè)? 檢測(cè)方法 ： MSAP， bisulfitesequencingv 5’氮胞苷處理對(duì)水稻 DNA甲基化的影響? 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 實(shí)驗(yàn)材料? 儀器? 試劑? 實(shí)驗(yàn)方法v 5’氮胞苷處理水稻幼苗v 植物基因組 DNA的提取與純化v 基因組 DNA酶切 連接接頭v PCR擴(kuò)增 ： 預(yù)擴(kuò)增 ， 選擇性擴(kuò)增v PAGE電泳? 預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果? 注意事項(xiàng)與建議? 思考題? 參考文獻(xiàn)v表觀遺傳學(xué)：? 不需要基因序列改變而產(chǎn)生的可遺傳的基因表達(dá)改變；主要包括 DNA的甲基化修飾和組蛋白氨基酸的末端修飾。? 表觀遺傳變異包括 :X－染色體失活、轉(zhuǎn)基因沉默、核仁顯性和基因組印記等方面。? 表觀遺傳變異的原因 ：是由于表觀遺傳密碼的改變，如DNA甲基化、組蛋白的公家修飾改變等。? DNA甲基化：在 DNA復(fù)制后，經(jīng) DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（ DMT）催化，將 S腺苷酰 L甲硫氨酸 (SAM)上的甲基基團(tuán)連接到DNA分子腺嘌呤堿基或胞嘧啶堿基上，進(jìn)行 DNA修飾的過(guò)程。vDNA甲基化的方式? 胞嘧啶甲基化? 腺嘌呤甲基化DAM(DNA腺嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶)識(shí)別回文序列 GATC,在此位置兩條鏈的腺嘌呤 N6位置上同時(shí)甲基化，同時(shí) SAM轉(zhuǎn)變?yōu)镾AH(S腺苷高半胱氨酸 )在 DMT(DNA甲基轉(zhuǎn)移酶）的作用下， CpG（ CNG,CCGG）位點(diǎn)胞嘧啶 C5被甲基化 DNA甲基化作用圖 1胞嘧啶甲基化過(guò)程圖 2腺嘌呤甲基化過(guò)程v DNA甲基化的生物學(xué)意義? 影響基因表達(dá)狀態(tài)：通過(guò)該表基因調(diào)控區(qū) DNA甲基化程度調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄圖 3甲基化與基因沉默? 參與基因組防御：通過(guò)高度甲基化而使外源 DNA（如轉(zhuǎn)座子）處于沉默狀態(tài)? 提高環(huán)境適應(yīng)能力：在不改變基因型的情況下產(chǎn)生可遺傳的新表型vDNA胞嘧啶甲基化的種類和形成? 從頭甲基化 (de novomethylation)vDNMT3a， DNMT3bv在完全沒有甲基化的 DNA上加上甲基。? 維持甲基化 (maintenancemethylation)vMet1， DNMT1v較特異地識(shí)別半甲基化狀態(tài)的 DNA，負(fù)責(zé)在細(xì)胞分裂過(guò)程中依據(jù) DNA母鏈的甲基化狀態(tài)給新合成的 DNA鏈上加上甲基。圖 4兩種胞嘧啶甲基化方式 DNA胞嘧啶甲基化檢測(cè)方法? 使用對(duì)胞嘧啶 5’甲基化狀態(tài)敏感的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切處理，然后檢測(cè)多態(tài)性：v甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性 (MSAP,MethylationSensitiveAmplificationPolymorphism)? 胞嘧啶轉(zhuǎn)化為其它堿基，然后對(duì)比測(cè)序：v重亞硫酸鹽測(cè)序 (Bisulfitesequencing)GCmTACT重亞硫酸鈉 GCmTATT測(cè)序 測(cè)序? 此外，還有單核苷酸法，甲基化接受力的檢測(cè)法，CpG島分離法和基因活性測(cè)量法，基因芯片法等 v MSAP? 用途：v 最常用的大規(guī)模檢測(cè)基因組甲基化變異水平和位點(diǎn)的手段? 原理：v 利用對(duì) DNA甲基化敏感性不同的同裂酶分別切割 DNA，產(chǎn)生不同的酶
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