dna重組ppt課件(2)(已修改)
2025-05-17 12:09 本頁(yè)面
【正文】 第二章 DNA重組 不同來(lái)源的 DNA分子，通過(guò)磷酸二酯鍵連接而重新組合的過(guò)程。 第二節(jié) 限制性核酸內(nèi)切酶 和 DNA片段化 手術(shù)刀 (基因的剪刀 )準(zhǔn)確切割 DNA 分子手術(shù)刀 限制性核酸內(nèi)切酶 (限制酶 ) 定義 是一類能 識(shí)別 雙鏈 DNA中特殊的核苷酸序列，并使每條鏈的一個(gè)磷酸二酯鍵 斷開 的內(nèi)脫氧核糖核酸酶。 一、限制性核酸內(nèi)切酶 （ restriction endonuclease） 生物學(xué)功能 防止外源 DNA入侵，成為生物細(xì)胞內(nèi)限制性修飾系統(tǒng)的一部分。 存在 主要是 細(xì)菌 ，少數(shù)霉菌和藍(lán)藻。 限制酶的命名 第一個(gè)字母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬名，用大寫； 第二、第三個(gè)字母是該細(xì)菌的種名，用小寫； 第四個(gè)字母代表菌株； 用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序。 H in d Ⅲ 屬 株 序 屬 種 株 序H aemophilus in fluenzae Rd 株 流感嗜血桿菌 d 株的第三種酶 類型 Ⅰ 型限制酶 Ⅱ 型限制酶 Ⅲ 型限制酶 （ 1） Ⅰ 型限制酶（無(wú)用） ① 分子量： 30萬(wàn) dal左右 ② 組成： 3種亞基 a. 特異性亞基：具特異性識(shí)別 DNA序列的特性。 b. 修飾亞基：具甲基化酶活性。 c. 限制亞基：具核酸內(nèi)切酶活性。 ③ 輔助因子：需 Mg2+、 ATP和 S腺苷甲硫氨酸（ SAM）。 ④ 識(shí)別和切割位點(diǎn)：不一致（距識(shí)別位點(diǎn) 5’一側(cè)數(shù)千堿基處隨機(jī)切割 DNA分子）。 （ 2） Ⅱ 型限制酶（十分有用） ① 分子量： 2萬(wàn)～ 10萬(wàn) dal（較?。? ② 組成： 一種多肽，常以同源二聚體形式存在。 ③ 輔助因子： 無(wú)需輔助因子，或只需 Mg2+。 ④ 識(shí)別和切割位點(diǎn)： 相一致。 （ 3） Ⅲ 型限制酶（無(wú)用） ① 組成： 兩個(gè)亞基 a. M亞基：負(fù)責(zé)位點(diǎn)的識(shí)別與修飾。 b. R亞基：具核酸酶的活性。 ② 輔助因子： 需 Mg2+、 ATP和 SAM ③ 識(shí)別和切割位點(diǎn) ：不一致（距識(shí)別位點(diǎn) 3’一側(cè)約 25bp處切割 DNA分子）。 二、 Ⅱ 型限制酶的特性 不同限制酶能專一地識(shí)別不同的特異核苷酸序列 ＝ 6個(gè)（大多數(shù)）： 如 EcoRⅠ 5’GAATTC3’ HindⅢ 5’AAGCTT3’ BamHⅠ 5’GGATCC3’ ?識(shí)別序列 （ P36） 6個(gè)： 如 AsuⅠ 5’GGNCC3’（ 5個(gè)） MboⅠ 5’GATC3’ （ 4個(gè)） 6個(gè)： 如 NotⅠ 5’GCGGCCGC3’（ 8個(gè)） ? 有的限制酶識(shí)別序列包含在另一種限制酶內(nèi)。 如： Sau3A識(shí)別 ： GATC BamHⅠ 識(shí)別 ：
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