植物細胞培養(yǎng)ppt課件(已修改)
2025-05-13 02:17 本頁面
【正文】 第二部分 細胞培養(yǎng) 定義 ： 植物細胞培養(yǎng)（ plant cell culture）是指在離體條件下對植物單個細胞或小的細胞團進行培養(yǎng)使其增殖的技術 根據(jù)培養(yǎng)規(guī)模 :小規(guī)模培養(yǎng)和大批量培養(yǎng)； 根據(jù)培養(yǎng)方式 :懸浮培養(yǎng)、單細胞培養(yǎng)等； 根據(jù)要求產(chǎn)物 :用于誘變的細胞培養(yǎng)和生產(chǎn)次生產(chǎn)物的細胞培養(yǎng) 。 167。 167。 167。 167。 167。 完整的植物器官分離單細胞 由培養(yǎng)組織中分離單細胞 撕去下表皮 露出葉肉細胞 用解剖刀刮下細胞 1 機械法 第一種方法：用刀片刮葉片 第二種方法：葉片研碎、離心 研碎成粉 加研磨介質 過濾、離心 注意 ： 只有薄壁組織排列松散，細胞間結觸點很少時用機械法分離葉肉細胞才能取得成功。 1 酶解法 ： Takebe等（ 1968） 最早報道：用果膠酶處理可以分離大量的葉肉細胞 加果膠酶 過濾、離心 由培養(yǎng)組織分離單細胞 莖段 步驟： (1) 誘導產(chǎn)生愈傷組織； (2) 愈傷組織反復繼代，使組織不斷增殖，提高愈傷組織的松散性； 搖床用于振蕩 繼代 懸浮 (3)將愈傷組織在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，建立懸浮培養(yǎng)物 15ml medium/1g 120rpm culture transfer 1time/3d 3 weeks 100130目網(wǎng)過濾 Centrifuge(離心） isolation 注意： 選擇適宜的外植體：幼胚、胚軸、子葉是最常使用的外植體。 選擇適宜的培養(yǎng)基：較高濃度激素濃度，特別是生長素，必要的附加物質，例如水解酪蛋白、 Pro、 Gln。 繼代多次，以獲得均勻一致疏松的愈傷組織。 167。 (cell suspension culture) 一、細胞懸浮培養(yǎng)的概念和意義 懸浮培養(yǎng)是將單個游離細胞或小細胞團懸浮在液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)增殖的技術。 Bioreactor for continuous cell suspensions Shaker for suspension culture Culture wheel 細胞可以不斷增殖，形成高密度的細胞群體，適于大規(guī)模培養(yǎng)； 能夠提供大量較為均勻的細胞，為研究細胞的生長、分化創(chuàng)造方法和條件。 細胞懸浮 植物 人工種子 Secondary products 原生質體分離 突變篩選 細胞懸浮培養(yǎng)的應用 三 .細胞懸浮培養(yǎng)的方法 培養(yǎng)基 對于用愈傷組織制備的懸浮細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基以原愈傷組織繼代時的培養(yǎng)基除去瓊脂為好。為了提高細胞的分散度，對于生長素和細胞分裂素的比例需要進行一些調節(jié)。 培養(yǎng)細胞的起始密度及細胞記數(shù) （ 1）最低有效密度的概念 在懸浮細胞培養(yǎng)中，使懸浮培養(yǎng)細胞能夠增殖的最少接種量稱為最低有效密度或者臨界的起始密度。 最低有效密度由于培養(yǎng)材料、原種培養(yǎng)條件，原種保存時間長短、培養(yǎng)基的成分不同而有差異，一般為 104~105細胞 /ml 2）細胞記數(shù) 要保證細胞培養(yǎng)的最低有效密度，在細胞游離后要對分離的單細胞進行記數(shù)，可用血球記數(shù)板 懸浮培養(yǎng)細胞數(shù)目的增殖變化 細胞生長各個時期的特點 ： 滯后期（延遲期） :細胞很少分裂，其長短與接種量大小和繼代時原種細胞所處的生長期有關 對數(shù)生長期 :細胞分裂活躍，細胞數(shù)目增加，增長速率保持不變直線生長期 :細胞生長和發(fā)育最明顯的時期 緩慢期 :生長逐漸緩慢 ,培養(yǎng)液消耗將盡，有毒代謝物質增多，氧氣減少。 靜止期 :生長幾乎處于停止狀態(tài)，細胞數(shù)目增加極少 ,甚至開始死亡。 討論 : A、滯后期的長短主要取決于在繼代時原種培養(yǎng)細胞所處的生長期和轉入細胞數(shù)量的多少。 B、加入條件培養(yǎng)基可以縮短滯后期。 條件培養(yǎng)基：曾培養(yǎng)過一段時間組織或細胞的培養(yǎng)基。 C、縮短兩次繼代時間間隔，則可使懸浮培養(yǎng)的細胞一直保持對數(shù)生長期。 D、如果使處在靜止期的細胞懸浮液保持時間太長，則會引起細胞的大量死亡和解體 操作注意事項： 對懸浮培養(yǎng)細胞繼代時，進液口的孔徑要小，只能通過單細胞或小細胞團（ 2
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1