【正文】 水蛭養(yǎng)殖及深加工技術大全 高效表達重組水蛭素及其生產方法 本發(fā)明涉及一種生物工程的抗栓藥物及其生產方法，具體而言是涉及一種新型水蛭素及其生產方法。采用全人工合成的方法獲得變異的HV2 全基因，在其 5’端上 游加入一段合適前導序列。構建畢赤酵母分泌型表達載體 pHV2，載體轉化宿主細胞 GS115，并整合入宿主細胞的染色體中。篩選高效表達菌株，經優(yōu)化發(fā)酵 誘導、分離純化步驟，提高了重組基因產物的生產效率，產物表達水平和生物學活性，以及對抗凝、抗栓的藥效學研究表明，高于文獻報道，這為水蛭素 II型的大 規(guī)模生產和臨床 應用的深入研究提供了物質來源。 菲牛蛭的養(yǎng)殖方法及水蛭素的提取技術 本發(fā)明提供了一種菲牛蛭的養(yǎng)殖方法及水蛭素的提取方法，是通過引進優(yōu)良種源或野外捕捉到健壯的菲牛蛭，進行人工分級分段馴、喂養(yǎng)，進行人工繁殖，待飼養(yǎng)到 一定程度，采用化學物質刺激鮮活菲牛蛭使其分泌出唾液，然后對其唾液進一步分離過濾得到水蛭素粗品，再將水蛭素粗品進行深加工得到符合醫(yī)用的水蛭素，該菲 牛蛭含抗凝血物質比其它品種菲牛蛭含量高，藥用效果好，提取水蛭素方法簡單，提取水蛭素后將菲牛蛭放回水池養(yǎng)殖，相隔一周或 10 天又可以再提取，每條鮮活 菲牛蛭 可以反復提取 67 次，每次能提取水蛭素粗品67毫升左右，產品質量好，又節(jié)約資源，提高了菲牛蛭的利用價值。 水蛭溶栓軟膠囊及其制備方法 一種水蛭溶栓軟膠囊，包括囊殼和囊殼內的水蛭提取物；其制備方法包括： (1)明膠先加水使其膨脹，將甘油及剩余的蒸餾水在煮膠鍋中加熱至 70～ 80℃ ，混 合均勻，加入膨脹的明膠攪拌溶化，加入防腐劑，保溫 1～ 2小時，靜置過濾，保溫待用； (2)將蜂蠟加熱熔融后加入植物油與水蛭提取物形成的混懸液中，攪拌 均勻呈流動的半固體狀；或在均質機中分散均勻； (3)壓制法或滴制法制備軟膠囊；本發(fā)明能 夠克服已有劑型的缺點，藥物的有效成分高度分散在基質中，且特殊 情況下不用水即可吞服。生物利用度高，外形美觀，能掩蓋藥物的不良嗅味，滿足該類劑型在外觀、崩解和理化穩(wěn)定性方面的標準。 水蛭素口服緩 (控 )釋劑型 水蛭素是迄今為所知最強的凝血酶抑制劑，天然水蛭素和應用基因工程技術生產的重組水蛭素都已經應用于臨床上心腦血管方面疾病的治療?，F存的國內外水蛭素類 藥物在劑型設計上都是胃腸道直接溶解給藥和注射給藥。給藥后藥物在體內壽命較短，有效血藥濃度僅能維持 1 小時左右，難以適應大多數慢性高凝狀態(tài)疾病患者長 期抗凝治療的需 要。本專利發(fā)明的口服水蛭素緩 (控 )釋新劑型延長了水蛭素在體內的壽命，有效血藥濃度維持可達 624，并有較好的生物利用度，具有潛在新 一代口服抗凝藥物的價值。 重組水蛭素口服腸溶緩釋制劑 本發(fā)明涉及重組水蛭素 (hirudin)口服腸溶緩釋制劑的組分、制備和應用范圍，經動物試驗證實，該類制劑口服給藥對家兔頸靜脈血栓形成有明顯的抑制作 用，對大鼠外周血有顯著的抗凝功能。該制劑能有效防止胃腸蛋白酶對重組水蛭素的降解作用，適用于有血栓形成傾向患者的抗凝治療。 蛇粉和水蛭粉組合物及制備方法 本發(fā)明公開了一種蛇粉和水蛭粉 組合物，該組合物中各成份的重量百分組成是水蛭粉 10％ 30％和蛇粉 70％ 90％。該組合物的制備方法是先把水蛭用水洗 干凈后，用熱水泡死，蛇除去內臟，然后進行蒸汽滅菌、高溫干燥，把干燥后的蛇、水蛭原料按比例混合后，進行超細粉碎，最后進行分裝，就得到成品。本發(fā)明具 有增強人體體質、提高人體免疫能力、改善血循環(huán)能力的功效。 一種水蛭提取物及其生產方法和用途 本發(fā)明涉及一種水蛭提取物及其生產方法，以及該提取物的應用，其特征是該提取物采用菲牛蛭活體生理鹽水提取，或活體冷凍融溶后生理鹽水提取，并經冷凍干燥 方法制備而 成的固體提取物。該提取物生產方法簡單，成本低廉，保存期長，采用抗凝血酶活性分析法進行質量監(jiān)控，使質量穩(wěn)定，產品的療效有保證。該提取物適 用范圍廣泛，可用于制備治療血栓引起的心腦血管疾病的藥物。 水蛭素與親脂化合物的水蛭素結合物 本發(fā)明涉及由水蛭素和一種或多種親脂化合物形成的水蛭素結合物，其中，所述親脂化合物的辛醇／水分配系數大于 ，而且與水蛭素化學相連，并涉及其制備和其應用。 用水蛭素和乙酰水楊酸治療未溶栓的急性心肌梗塞病人的方法 本發(fā)明發(fā)現將水蛭素和乙酰水楊酸（ＡＳＡ）組合物給予未經任何溶栓劑治療的病 人，抑制或預防心肌或心血管疾病。本發(fā)明進一步涉及到血小板失活的藥物乙酰水 楊酸和直接的凝血酶抑制劑水蛭素用于治療未經溶栓治療的急性心肌梗塞病人的藥物組合物。一種含有水蛭素和ＡＳＡ協(xié)同物而不含任何溶栓劑的藥物組合物在本發(fā) 明的治療和預防方法中是特別有用的。 無腥味水蛭粉炮制工藝 一種無腥味水蛭粉的炮制工藝，其特征是將水蛭洗凈入高溫油內炸焦黃后晾干研磨成粉。經炮制的水蛭無腥 味，便于服用，可制成口服粉，治療中風、半身不遂、心腦血管疾病，還可制成保健食品。 由南美水蛭中提取和純化抗凝血成分 申請人已經從水蛭 ()的唾液腺提取物中分離出抑制因子 Xa的物質。應用二乙氨乙基纖維素和肝素－瓊脂糖色譜樹脂分離提取物，用遞增 的鹽梯度進行洗脫。應用結合到Ａ ffiCel15 樹脂上的因子 Xa，使提取物進行親和色譜分離，用含有芐脒的ＨＥＰＥＳ進行洗脫。反相色譜分離得到幾 種具有抑制因子Ｘａ活性的純肽或純蛋白質。本申請還公開了上述ＦＸａ抑制劑的性質和臨床上應用的組合物。 含水蛭素衍生物的分泌物 由大腸桿菌分泌型突變株獲得水蛭素衍生物的方法包括：（１）以編碼水蛭素衍生物的基因直接定位于編碼細菌信號肽的ＤＮＡ片段下游的方式構建重組載體， （２）用構建的重組載體轉化大腸桿菌分泌型突變株，（３）在培養(yǎng)基中培養(yǎng)轉化后的細菌，（４）由培養(yǎng)基中獲得水蛭素衍生物，并獲得含有一個或更多個基因構 建的拷貝的重組載體，該構建基因編碼由細菌信號肽組成的蛋白和水蛭素衍生物組成的蛋白，水蛭素衍生物Ｎ－末端氨基酸序列是 Ａ－Ｔｈｒ－Ｔｙｒ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ．其中Ａ為Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ或Ａｓｎ。 水蛭素的重組體制備方法 利用重組ＤＮＡ的方法制備具有抗凝血酶活性的水蛭素或水蛭素樣多肽。水蛭素或水蛭素樣多肽 優(yōu)選在大腸桿菌或昆蟲細胞中表達。 具有改善穩(wěn)定性的新的合成的異水蛭素 本發(fā)明涉及具有改善穩(wěn)定性和在３３，５２，５３，５４與５ 5位有不同氨基酸的異水蛭毒，以及用遺傳工程制備這類異水蛭素的方法，在酵母菌或大腸桿菌中獲得表達的產物，經離子交換和反相層析法得到高純度的異水蛭素。 醫(yī)用天然水蛭素的提取方法 醫(yī)用天然水蛭素的提取方法，涉及動物有效成分的提取。本發(fā)明采用從整體水蛭中提取水蛭素，先把水蛭漿加溫后調節(jié)ｐＨ值至４．４ —４．６，又降溫再調節(jié)ｐＨ 值至６ —７，然后離心脫水，殘渣用生理鹽水反復洗滌，母液透析后用９５％ 以上乙醇分級沉淀，沉淀真空干燥后用水溶解，再次透析，最后真空干燥得到精品。用 本發(fā)明提取的水蛭素工藝方法簡便，成品質量合格，而且收率提高到千分之四，從而大大降低了產品成本。 重組水蛭素及其復合物用于制備預防和治療血栓病藥物 本發(fā)明涉及一種藥物和制備方法，特別是涉及一種以基因的人工合成方法制備重組水蛭素及其水蛭素與復合物的用于預防凝血和治療血栓病的藥物。 $本發(fā)明為了提 高提供一種重組水蛭素與復合物按１ ∶２０ —１ ∶ ２重量比例配成用于抗凝血和治療血栓病的藥物，及其制備本發(fā)明的藥物方法。該方法簡單，易于掌握合成，而 且 大大地提高了制備的藥物的藥效。 高分子量的脫硫水蛭素 本發(fā)明屬于凝血酶抑制劑領域，并且描述了經修飾的脫硫水蛭素的制備，更具體地講是借助于遺傳工程手段制備脫硫水蛭素。本發(fā)明的另一個目的是提供了使一種經 修飾的脫硫水蛭素變性并復性至具生物學活性的凝血酶抑制劑的方法以及使兩種或多種所述脫硫水蛭素結合形成更高分子量的凝血酶抑制劑的方法。 用親合色譜法提純水蛭素的方法 本發(fā)明公開了一種從含有水蛭