【正文】 鋪薄層板的經(jīng)驗總結(jié),不能太稀了,不然硅膠的黏附性不好,不容易和硅膠混勻,%,這樣也不容易有氣泡,鋪好后將玻璃板放在桌邊小心上下顛動,保證薄層板所以地方都一樣均勻.,這種情況CMCNa不能太稀,容易擴(kuò)散點樣量宜少,早上的時候正好薄層板已干,，如果未完全干會導(dǎo)致活化的時候薄層板硅膠開裂. 一、手工鋪板是非?？简?zāi)愕哪土Φ氖虑?，最好是找實驗室的GGJJMMDD們一起，一來速度快，二來大家儀器交流心得。1．CMCNa溶液必須配制的好，放置的也要很好，完全分層之后只能取上清液。上清液要澄清透明，時間太長的CMCNa可能會發(fā)黃，如果有霉菌出現(xiàn)的話，絕對不能使用。2．就是硅膠和CMCNa溶液的比例可以適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)，根據(jù)你所需要薄層板的軟硬來微調(diào)?？梢砸粋€人研磨，一個人緩慢的倒CMCNa溶液。研磨時最能考驗?zāi)愕亩?，我覺得你該找女生來磨，但是那種太文弱的不行。研磨時要順著一個方向，速度不宜快，要順著研缽的邊緣，觀察仔細(xì)，一定要把氣泡趕盡殺絕。研磨好的因改是均勻的，沒有氣泡，沒有固體的粉末類異物，溶液有一定的粘性。3．鋪板，我覺得是各人各喜歡，可以順著板中間倒，也可以順著某個邊緣倒，倒時也要注意不能引入小氣泡?？梢杂貌ＡО粢芤浩戒佋诓ＡО迳希槺阏f一句，玻璃板應(yīng)該很干凈，沒有劃痕，沒有缺口，4個角要“健全”），如有需要，可以雙手10個指頭拖住玻璃板，有節(jié)奏的顛，使得硅膠分?jǐn)倓蚍Q。尤其是4個角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。顛好的板，表面看上去要光滑平整，沒有氣孔。鋪好的板，要找個干凈的地方放置晾干，這個過程也是耐心的等著它，請勿打擾！自然晾干后，活化一下（105攝氏度40分鐘左右），置于密封的干燥器保存。最后想說一下，如果你鋪板目的是做分析用的話，肯定得很仔細(xì)用心。如果僅是天然藥化那種粗略檢查過柱子得到的餾分純度，那就沒有必要這么復(fù)雜了，也就是說速度可以快點，板的要求也沒有必要這么高！自己多看看人家怎么鋪的，練練手，肯定就成高手了！ 二、樓上的講得很好，我再補(bǔ)充兩點切身體會：（1）CMCNa溶液煮了以后不能再用冷水兌，否則，幾天以后就會變綠，起霉。（2）如果有抽濾裝置你可以直接把CMCNa溶液濾過，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子），還有兩個好處一是節(jié)省CMCNa溶液，二是倒濾過的CMCNa溶液的時候不必?fù)?dān)心會把下層的不溶物倒出來了?。?三、本人的工作經(jīng)驗：薄層層析制板1. 配制4%～5%的羧甲基纖維素（CMC）：稱取CMC，溶于冷水中，邊加熱邊攪拌，直至成為清澈、透明的溶液。2. 40%硅膠：按CMC溶液的量、按40%的比例稱取薄板層析硅膠，倒入大研缽中，與CMC溶液混合，充分研磨成均勻糊狀。3. 加入幾滴乙醇或丁醇，可起到消泡的作用。4. 將載玻片置于平臺上，用藥匙舀取糊狀硅膠，均勻地鋪在載玻片表面。5. 自然干燥后，放入烘干箱烘12小時以上。再在105~110℃活化，~1小時，冷卻后即可使用。 四．我也來談一下自己的一點經(jīng)驗吧。CMCNa：：1較好，樓上師兄說的3：1應(yīng)該也可以，但是硅膠配的過稀時后果很嚴(yán)重，板子在晾干時會出現(xiàn)許多裂縫，象萬壽菊樣的開花狀，完全不能用。此乃本人的慘痛經(jīng)歷，當(dāng)時不知道是硅膠過稀的原因，還以為冬天太冷板子給凍裂了，又作了一批放在暖氣房，還是照裂不務(wù)。浪費了整整一瓶GF254啊（做的是制備板用量較大）。 有個問題至今不明白，請教各位大蝦，晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂。 樓上的兄弟，我也有過同樣的遭遇。當(dāng)時板子鋪得太厚，后來加長研磨的時間就好了。 首先我想說的是手工鋪制的板子，只適宜于定性分析，不宜于分離定量。手工鋪板的要點我認(rèn)為有如下幾點：：硅膠G板和硅膠CMC板。前者是煅石膏（石膏經(jīng)140℃烘烤3—4小時）與硅膠按1—：10混合均勻。每份硅膠G加水2—3份調(diào)成糊狀，即可使用。后者的操作各位大蝦已有論述。在使用前一定要處理干凈，用洗滌液或肥皂水洗滌，再用水沖洗干凈，烘干；，加熱溶解后，放冷，最好濾過使用；消泡劑可直接與CMCNa溶液混合使用；4. 我在做時，先在研缽中加CMC溶液，再加硅膠，按同一方向研磨，這樣更容易調(diào)勻不易包埋硅膠顆粒；稠度以用研棒粘取，成連珠狀不成線狀下滴為好；配制時遵循現(xiàn)配現(xiàn)用、少量多次的原則，因其易干影響鋪制效果。 薄層色譜法實踐技巧 目的： 1. 藥典：薄層色譜法系將供試品溶液點于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與事宜的對照物按同法所得的色譜圖對比，并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，用于鑒別、檢查或含量測定。 2. 如果你是做鑒別的話，薄層的系統(tǒng)適用性主要是做檢測限和分離度； 3. 如果你是做含量測定，比如說用薄層掃描法，薄層的系統(tǒng)適用性應(yīng)該做線性范圍、同板精密度、異板精密度、回收率； 4. 手工鋪制的板子，只適宜于定性分析，不宜于分離定量； 5. 化學(xué)藥一般是作有關(guān)物質(zhì)，需要一定的載藥量，所以要適當(dāng)增加厚度； 6. 中藥一般較難分離，需要薄板，以增加分離度； 7. 手工鋪制的板子常用的有：硅膠G板和硅膠CMCNa板。前者是煅石膏（石膏經(jīng)140℃烘烤3—4小時）與硅膠按1—：10混合均勻。每份硅膠G加水2—3份調(diào)成糊狀，即可使用。后者的操作各位大蝦已有論述。 8. 如果你鋪板目的是做分析用的話，肯定得很仔細(xì)用心；如果僅是天然藥化那種粗略檢查過柱子得到的餾分純度，那就沒有必要這么復(fù)雜了，也就是說速度可以快點，板的要求也沒有必要這么高； 9. 單純的手鋪板，技巧要求很高的，如果有鋪板器（也是完全手動的那種），鋪出的板子基本上可以保證均一的。 10. 要噴硫酸乙醇并定量的最好鋪水板；鋪水板是最考技術(shù)的，主要是碾磨技術(shù)，大家可以探討一下； 11. 硫酸乙醇顯色作定量分析的品種，但凡加了CMCNa的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時，后改用不加CMC輔的水板來作，就不會有烘糊現(xiàn)象，故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應(yīng)。感覺輔水板關(guān)鍵是硅膠G與水的比例要達(dá)1：，而且研磨后要盡快涂布，不能易于凝固而難于涂布。 展開： 12. 藥典：展開容器 應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，并有嚴(yán)密的蓋子，底部應(yīng)平整光滑，或有雙槽。上行展開一般可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時須能密閉。水平展開用專用的水平展開缸。 13. 藥典：將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點5mm為宜（切勿將樣點侵入展開劑中），密封頂蓋，待展開至規(guī)定距離，除另有規(guī)定外，一般為8～15 cm，溶劑前沿達(dá)到規(guī)定的展距，取出薄層板，晾干，按正文項下的規(guī)定檢測。 14. 展開劑的選擇（分離單體）： （1）粗分，也就是當(dāng)你的樣品極性范圍比較大的時候，可以直接采用極性較小的流動相。然后將前沿、原點以及前沿及原點間的硅膠分別刮下，提取。這樣，樣品就被分為幾個部分，而各個部分的極性相差也比較小了。然后再將這幾部分分別進(jìn)行下面的細(xì)分TLC。 （2）細(xì)分。經(jīng)過粗分之后，我們一般對各個部分的極性都能夠做到心中有數(shù)了。比如，被沖到前沿的樣品，要采用更小極性強(qiáng)度的流動相，而死吸附部分，則需要較大強(qiáng)度的流動相。 我們在初步確定了流動相的極性強(qiáng)度之后，可以自己設(shè)計幾個溶劑系統(tǒng)。在選擇流動相的組成的時候，可以參考snyder的溶劑分類，從質(zhì)子受體，質(zhì)子給體和偶極作用的溶劑中各選擇一種，然后再選擇一個強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑。當(dāng)然，也可以參考文獻(xiàn)中采用的流動相。選好了要用的流動相，就可以根據(jù)我們初步確定的極性強(qiáng)度得到流動相的配比了（如果是二元流動相的話）。如果是三元及以上的流動相，可以采用Glajch和Youngstrom的七種溶劑系統(tǒng)的方案進(jìn)行選擇流動相的配比。然后從中選擇分離效果比較好的組合。 最開始可以采用微量圓環(huán)法（將樣品點在中間，然后將流動相用毛細(xì)管從原點向圓周擴(kuò)散）和小板實驗法來摸索，然后再應(yīng)用于大的制備TLC。 我也曾直接采用圓環(huán)法，也稱為環(huán)形展開，來進(jìn)行制備的。本來是應(yīng)該有專門的U形展開室來展開，但是因為我們這里沒有這個設(shè)備，所以我一般采用簡易的方法：即將樣品點在中央，然后用尖頭的滴管源源不斷的向圓心滴加流動相的。樣品會分出不同的同心圓而得到分離。這樣的好處有三：（1）只要操作小心，各個同心圓真的就非常圓，即不會出現(xiàn)線性層析中的邊緣效應(yīng)等。（2）分離效果更好，拖尾現(xiàn)象小于線性層析。（3）由于圓心式展開的Rfc是線性展開的Rf的平方根，要大于線性展開的Rf，所以分的更開。弊端在于將各個組分從板上刮下的時候需更小心才不會使之混雜。 15. 當(dāng)展開劑極性差別很大時，特別是極性大的成分所占比例很小時，往往會出現(xiàn)溶劑脫混現(xiàn)象。在這種情況下，展開槽 飽和與不飽和差別沒有顯著性差異，薄層板上往往會出現(xiàn)類似分層的現(xiàn)象，所以只有換展開系統(tǒng)來調(diào)整。 16. 甲醇用量較小，而甲醇又易揮發(fā)，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。 17. 如果經(jīng)過一次展開后,展開槽內(nèi)仍剩下足夠的展開劑,可以展開第二塊板子嗎？ 個人認(rèn)為最好不要。一般來說為得到較好的分離效果，應(yīng)先飽和一下，第二次使用如果還要飽和就會造成另一側(cè)殘留的展開劑附著在板子上，造成影響。而且有機(jī)溶劑一般較易揮發(fā)。 18. 自己手鋪的薄層板怎么都沒有買來的高效板好用，用過之后也可以用極性大些的展開劑將展開的點，二次展開跑過，這樣就可以重復(fù)利用了。 顯色： 19. 藥典：顯色裝置 噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出；浸漬顯色可用專用的玻璃器皿或用適宜的玻璃缸代替；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的干燥器代替。 20. 說關(guān)于薄層板加熱變黑的問題，其實很容易解決：當(dāng)噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了，可以用電吹風(fēng)在板子背面吹吹就能顯色了。我們實驗室里一般都采用此法，簡便、快潔．如果一非想使用烘箱烘的話，一定要用帶玻璃窗的，當(dāng)看到顯色了就取出，不然不好控制顯色時間，時間過長，CMC容易碳化變黑。 21. 根據(jù)我的經(jīng)驗，薄層版變黑與CMC－Na的濃度過大有關(guān)，如果你留意的話，你會發(fā)現(xiàn)，當(dāng)顯色劑中有濃硫酸時，加熱時間稍長就會變黑（其他顯色劑是沒事的），我老師說這是因為濃硫酸把CMC－Na炭化了，其實這種情況你只要適當(dāng)降低CMCNa的濃度就可以了，當(dāng)然如果不加CMCNa的話容易把板弄破。 22. 顯色劑：稱取100mgDC紅色19號（染料索引號No 45170）溶于150ml二乙醚、70ml 95％乙醇和15ml水。此溶液可保存一周。薄層板噴布顯色劑R6后，立即在366nm下觀察和記錄。 問題與應(yīng)用： 23. 板子會裂口，一則可能是因為硅膠的比例太大，二則可能是，板子要在常溫下晾干后，再在烘箱中活化。如果鋪完不久就在較高溫度下，裂口的幾率就比較高的。 24. 板鋪好后，自然涼干最好，一定是要從玻板后看也是干的，注意一定要放平，最好控制空氣流動；然后再放到烘箱中活化，這樣就不會有裂開的現(xiàn)象了； 如果