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sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳(已修改)

2025-01-31 09:35 本頁面
 

【正文】 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 SDSPolyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE 一、什么是 SDS? 十二烷基硫酸鈉( sodium dodecyl sulfate,SDS) 是一種陰離子去污劑。它在水溶液中以單體 ( monomer) 和分子團( micellae) 的混合形 式存在。 SDS的作用 破壞 蛋白質(zhì)分子之間以及其他物質(zhì)分子之間的 非共價鍵 ,使蛋白質(zhì)變性而改變原有的構象,保證蛋白質(zhì)分子與 SDS充分結合而形成帶負電荷的 蛋白質(zhì) SDS復合物 。 二、 SDSPAGE的基本原理 (一)蛋白質(zhì)分子的解聚 樣品介質(zhì)和聚丙烯酰胺中加入離子去污劑和強還原劑后,蛋白質(zhì)亞基的電泳遷移率主要取決于 亞基分子量的大小 ,而電荷因素可以被忽略。 SDS 陰離子去污劑 變性劑 助溶性試劑 斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵 分子去折疊 破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結構 強還原劑 巰基乙醇( β mercaptoethanal) 二硫蘇糖醇( dithiothreitol, DTT) 使半胱氨酸殘基之間的 二硫鍵 斷裂。 ? SDS和還原劑的作用: ( 1) 分子被解聚 或組成它們的多肽鍵 ( 2)氨基酸側鏈與 SDS充分結合 形成 帶負 電荷的 蛋白質(zhì) SDS膠束 。 ( 3)蛋白質(zhì) SDS膠束所帶的負電荷大大超 過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量, 消除 了不同分子之間原有的 電荷差異 。 蛋白質(zhì) SDS膠束的特點 ( 1)形狀像一個長橢圓棒 ( 2)短軸對不同的蛋白質(zhì)亞基 SDS膠束基本上是相同的。 ( 3) 長軸的長度 則與亞基分子量的大小成正比。
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