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聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離血清蛋白質(zhì)-liuchang(已修改)

2025-01-18 07:43 本頁(yè)面
 

【正文】 實(shí)驗(yàn)九:聚丙烯酰胺凝膠電泳法 分離血清蛋白質(zhì) 教 師:王麗華 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 熟悉電泳的基本原理 掌握 PAGE的基本原理與操作技術(shù) 具體安排 ? 上午 :制膠、原理講解 ? 中午:電泳(午餐) ? 下午:染色,脫色、觀察結(jié)果 電泳的基本原理 電泳: 是指帶電粒子在電場(chǎng)中向著與其所帶相反電荷的電極方向移動(dòng)的現(xiàn)象。 應(yīng)用 : 蛋白質(zhì) 、核酸和氨基酸等物質(zhì)的分離和鑒定。 帶電粒子的運(yùn)動(dòng)速度 遷移率 μ 即帶電顆粒在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的泳動(dòng)速度。 μ = Q X /6πrη Q 粒子所帶電荷量 X 電場(chǎng)強(qiáng)度 r 粒子半徑 η 介質(zhì)的粘度 影響電泳速度的因素 內(nèi)在因素 : 樣品自身性質(zhì) 外在因素 : 電場(chǎng) 緩沖液 支持介質(zhì) a. 電荷 b. 分子大小 c. 形狀 v=QX/6πrη 內(nèi)因: 待分離大分子的性質(zhì) 電場(chǎng) (三要素) 電流: μ 與電流成正比 電壓: μ 與電壓成正比 常壓電泳( 100500V) 高壓電泳( 50010000V) 電阻: μ 與電阻成反比 緩沖液 pH: 為電泳提供了恒定的 pH值和適宜的離子強(qiáng)度 解離性質(zhì) 解離程度 運(yùn)動(dòng)方向 電荷量 一般所用離子強(qiáng)度為 離子強(qiáng)度: 強(qiáng)度 過(guò)低 ,緩沖能力差,難以維持 pH恒定,同 時(shí)樣品擴(kuò)散嚴(yán)重; 強(qiáng)度 過(guò)高 ,減緩樣品的遷移率。 支持介質(zhì)(物) ? 吸附 :支持介質(zhì)對(duì)樣品的滯留作用 ,可導(dǎo)致樣品的拖尾。 ? 電滲:在電場(chǎng)中液體對(duì)固體支持物
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