聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離血清蛋白質(zhì)-liuchang(已修改)
2025-01-18 07:43 本頁面
【正文】 實驗九：聚丙烯酰胺凝膠電泳法 分離血清蛋白質(zhì) 教 師：王麗華 實驗?zāi)康? 熟悉電泳的基本原理 掌握 PAGE的基本原理與操作技術(shù) 具體安排 ? 上午 :制膠、原理講解 ? 中午：電泳（午餐） ? 下午：染色，脫色、觀察結(jié)果 電泳的基本原理 電泳： 是指帶電粒子在電場中向著與其所帶相反電荷的電極方向移動的現(xiàn)象。 應(yīng)用 : 蛋白質(zhì) 、核酸和氨基酸等物質(zhì)的分離和鑒定。 帶電粒子的運動速度 遷移率 μ 即帶電顆粒在單位電場強度下的泳動速度。 μ = Q X /6πrη Q 粒子所帶電荷量 X 電場強度 r 粒子半徑 η 介質(zhì)的粘度 影響電泳速度的因素 內(nèi)在因素 : 樣品自身性質(zhì) 外在因素 : 電場 緩沖液 支持介質(zhì) a. 電荷 b. 分子大小 c. 形狀 v=QX/6πrη 內(nèi)因： 待分離大分子的性質(zhì) 電場 （三要素） 電流： μ 與電流成正比 電壓： μ 與電壓成正比 常壓電泳（ 100500V） 高壓電泳（ 50010000V） 電阻： μ 與電阻成反比 緩沖液 pH： 為電泳提供了恒定的 pH值和適宜的離子強度 解離性質(zhì) 解離程度 運動方向 電荷量 一般所用離子強度為 離子強度： 強度 過低 ，緩沖能力差，難以維持 pH恒定，同 時樣品擴散嚴重； 強度 過高 ，減緩樣品的遷移率。 支持介質(zhì)（物） ? 吸附 :支持介質(zhì)對樣品的滯留作用 ,可導(dǎo)致樣品的拖尾。 ? 電滲：在電場中液體對固體支持物
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