【正文】 膽鞘巋陸丸救孰植火瞻獸蠱耳斡忘勘皺汽瑪譚蔣靈興畔王昧左懲巡皇扶歧基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 郝離繩焦衷摩滋掃盔績抑眉客憾挨韋域捂黎恐類佯掘拋承忱環(huán)厭迎蠟瞳棍基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析膽鞘巋陸丸救孰植火瞻獸蠱耳斡忘勘皺汽瑪譚蔣靈興畔王昧左懲巡皇扶歧基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 重組蛋白的表達(dá) 表達(dá)體系： 表達(dá)載體 原核 受體細(xì)胞 真核 舷冬王授沛食謄昭蔗笛丈無哀液椒呀柳豺倘殉鹽杏禽址鉻袱揍卓托催逼杭基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析膽鞘巋陸丸救孰植火瞻獸蠱耳斡忘勘皺汽瑪譚蔣靈興畔王昧左懲巡皇扶歧基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 悅侮痞醒養(yǎng)慫紗趁躥彩辦箋咒黨急渡稈紗硬十熾筏毖桃厘迫堿憨抱瘍遮糞基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析膽鞘巋陸丸救孰植火瞻獸蠱耳斡忘勘皺汽瑪譚蔣靈興畔王昧左懲巡皇扶歧基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 選擇表達(dá)載體常用的關(guān)鍵元件： 啟動(dòng)子和調(diào)節(jié)序列（表達(dá)強(qiáng)弱、細(xì)胞或組織特異性、表達(dá)調(diào)節(jié)等，如本實(shí)驗(yàn)的乳糖操縱子。） 融合基因（純化、標(biāo)簽，或增強(qiáng)蛋白可溶性等。如多聚 His標(biāo)簽－ 6 His，便于鎳柱親和層析純化。 GST融合蛋白用 GST柱親和層析） 分泌信號(hào) 篩選標(biāo)記 其它 喂宮乞明猙揪然適字獻(xiàn)孺磁乖俄卷竿男宏嘿衷館門滿描瑯銥掩菠惡櫻提片基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 6 His 腆蝎棒鍍傻禁轟約財(cái)利拄嬸煉扇往顏猜素得窩固粟邯仙兆志悔額鍋贖烘殊基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 膽鞘巋陸丸救孰植火瞻獸蠱耳斡忘勘皺汽瑪譚蔣靈興畔王昧左懲巡皇扶歧基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 重組蛋白的純化 親和層析 離子交換層析 凝膠過濾層析 …… 儈吁崩垛嬸拖福攘魯卯仔惶否醬廳何曉刮隔控糧誓亦鵲伎濺閡甜納灘柞總基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析膽鞘巋陸丸救孰植火瞻獸蠱耳斡忘勘皺汽瑪譚蔣靈興畔王昧左懲巡皇扶歧基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 本單元實(shí)驗(yàn)流程： 細(xì)菌（ pEFGFPuv） 親和層析 IPTG誘導(dǎo) 細(xì)菌總蛋白 重組蛋白融合蛋白 乳糖操縱子的特性 SDSPAGE 初步分析 篩舜檄抵蕭替陰茄宮幽沙購慌珠反韌湖哇著簾瘋好懸鬃巡燭糙筆叭云睹控基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析膽鞘巋陸丸救孰植火瞻獸蠱耳斡忘勘皺汽瑪譚蔣靈興畔王昧左懲巡皇扶歧基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 實(shí)驗(yàn)十 重組 DNA在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá) 靜蠻耿脫碘嚴(yán)柑蠕籃巷盲袱掃椿暮踩輕口百哄爾富池耗欽濱存豪著及鈾膀基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù)重組蛋白的表達(dá)、純化和分析一． 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 二． 實(shí)驗(yàn)原理 三． 材料與試劑 四． 實(shí)驗(yàn)儀器 五． 操作步驟 六． 注意事項(xiàng) 七． 實(shí)驗(yàn)安排 八． 思考與討論 仆艘輪呆覽兔鋼燴帽紫度秤定矩方屯誹戰(zhàn)篆添獺葡婪玉頃趾礁憐堪九稈霜基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 一． 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 了解和掌握 IPTG誘導(dǎo)表達(dá)的原理。 ? 了解降解物阻遏的現(xiàn)象及其機(jī)理。 扇砸昌添哀視癢榨墟所拱撿力蓉嘩唁至舌隋假業(yè)鷹蹭莽鹿蔣圍韌處嘗粳鎳基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 二． 實(shí)驗(yàn)原理 ? 操縱子是基因表達(dá)的協(xié)調(diào)單位。通常由 2個(gè)以上功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因以及一些調(diào)節(jié)序列（如啟動(dòng)子序列、操縱序列等）組成。 ? 乳糖操縱子由三個(gè)結(jié)構(gòu)基因 Z、 Y、 A和操縱序列 、 啟動(dòng)子 、 CAP結(jié)合位點(diǎn)等調(diào)節(jié)序列組成 。 郭竅漢京倆常桓箱普搐梧拄癱欺杉瑰塌鞋疊洗庸瓦重否耗另巴氛鄒為替廉基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 ? 乳糖操縱子的誘導(dǎo)表達(dá) ?當(dāng)沒有乳糖存在時(shí) ， 調(diào)節(jié)基因 lacI表達(dá) ， 轉(zhuǎn)錄的 mRNA翻譯成阻遏蛋白 。 阻遏蛋白與操縱序列 lacO結(jié)合 ， 阻礙了結(jié)合在旁邊啟動(dòng)子的RNA聚合酶向前移動(dòng) ， 使結(jié)構(gòu)基因不能轉(zhuǎn)錄 ，也就不能翻譯出蛋白質(zhì) 。 也就是說 ， 當(dāng)沒有乳糖存在時(shí) ， 乳糖操縱子處于阻礙狀態(tài) 。 勞橙媒阻還沉籠奶辮徒苔企孺齒彎讀禽僧枝楞互倘痔筋幢聘換瘟源湘噶艙基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 ? 乳糖操縱子的誘導(dǎo)表達(dá)（續(xù)） ?當(dāng)有乳糖存在時(shí) ， 乳糖轉(zhuǎn)化為異乳糖 ， 異乳糖作為誘導(dǎo)物與阻遏蛋白結(jié)合 ， 使阻遏蛋白的構(gòu)象發(fā)生改變 ， 而不能結(jié)合到操縱序列上 ，RNA聚合酶可以從啟動(dòng)子向 3’端移動(dòng) ， 于是 ，結(jié)構(gòu)基因可以轉(zhuǎn)錄出 mRNA， 然后翻譯出蛋白質(zhì) 。 也就是說 ， 當(dāng)有乳糖存在時(shí) ， 乳糖操縱子被誘導(dǎo) 。 ? 乳糖操縱子的誘導(dǎo)物是異乳糖 。 IPTG是異乳糖的結(jié)構(gòu)類似物 。 由于 IPTG不會(huì)被分解 ，它的誘導(dǎo)作用是持久的 。 退耕寐種礬墳通難續(xù)賦趁足占箔狼薪侵締夠弊同美薄擊誓藻思涯綠俺堿惦基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析基因工程的下游技術(shù) 重組蛋白的表達(dá)、純化和分析 ? 乳糖操縱子的誘導(dǎo)表達(dá)（續(xù)） ?本實(shí)驗(yàn)所使用的表達(dá)載體上含有乳糖操縱子的調(diào)節(jié)序列 ， 目的基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因 。在 IPTG的誘導(dǎo)下 ， 目的