細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)(已修改)
2025-01-28 21:12 本頁面
【正文】 第二章 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) METHODS AND TECHNIQUES 本章內(nèi)容提要 ? 第一節(jié) 顯微技術(shù) ? 一、光學(xué)顯微鏡 ? 二、電子顯微鏡 ? 三、顯微操作技術(shù) ? 第二節(jié) 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù) ? 第三節(jié) 細(xì)胞分離技術(shù) ? 第四節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交 第一節(jié) 顯微技術(shù) ? 光學(xué)顯微鏡：以可見光（或紫外線）為光源。 ? 電子顯微鏡：以電子束為光源。 — 、光學(xué)顯微鏡 ? 1. 構(gòu)成： ? ①照明系統(tǒng) ? ②光學(xué)放大系統(tǒng) ? ③機(jī)械裝置 ? 2. 原理：經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)目鏡進(jìn)一步放大成虛像。 （一）普通光學(xué)顯微鏡 ? 3. 分辨力 R：指分辨物體最小間隔的能力 。 ? R=． A． λ為入射光線波長(zhǎng)； 鏡口率 N． A． ＝ｎ sinα/2， n=介質(zhì)折射率； α=鏡口角（樣品對(duì)物鏡鏡口的張角） ? 思考： 如何提高顯微鏡的分辨能力？ 幾種介質(zhì)的折射率 介質(zhì) 空氣 水 香柏油 α 溴萘 折射率 1 （二）熒光顯微鏡 Fluorescence microscope ? 特點(diǎn)：光源為短波光 ， 如藍(lán)光 、紫外線等 ， 激發(fā)產(chǎn)生熒光 ， 波長(zhǎng)較短 ， 分辨力高于普通顯微鏡； ? 有兩個(gè)特殊的濾光片； ? 照明方式通常為落射式 。 分色鏡：反射和透射 屏障濾鏡：只允許特定波長(zhǎng)的熒光通過以保護(hù)眼球及降低視野暗度 激發(fā)濾鏡：只通過對(duì)標(biāo)本中熒光物質(zhì)合宜的激發(fā)光 Fluorescence image of epithelial(上皮 ) cell, DNA in blue and Microtubules in green ? 用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。 （三）激光共聚焦掃描顯微境 Laser confocal scanning microscope, LCSM ? 用激光作光源，逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描。 ? 能顯示細(xì)胞樣品的立體結(jié)構(gòu)。 ? 分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的 3倍。 ? 用途類似熒光顯微鏡，但能掃描不同層次，形成立體圖像。 laser confocal scanning microscope, LCSM LCSM Image of a Xenopus（ 非洲爪蟾 ） Melanophore（ 載黑素細(xì)胞 ） microtubule cytoskeleton (green) and the nucleus (blue) 激光共聚焦掃描 顯微鏡光路圖 （四）暗視野顯微鏡 dark field microscope ? 丁達(dá)爾現(xiàn)象 ? 聚光鏡中央有擋光片，照明光線不直接進(jìn)人物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。 ? 可觀察 4~200nm的微粒子。 ? 普通光學(xué)顯微鏡看不見未染色的組織 、 細(xì)胞和細(xì)菌 、 病毒等活機(jī)體的圖像 ， 因?yàn)橥ㄟ^樣品的光線變化差別 （ 反差 ） 很小 。 ? 標(biāo)本染色后改變了振幅 （ 亮度 ） 和波長(zhǎng) （ 顏色 ） ， 影響了反差而獲得圖像 。 但是染色會(huì)引起樣品變形 ， 也可使有生命的機(jī)體死亡 。 要觀察不染色的新鮮組織 、細(xì)胞或其他微小活體必須使用位相顯微鏡 。 ? 在構(gòu)造上 ， 相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處 。 1. 環(huán)
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