chapter2蛋白質(zhì)-3-蛋白質(zhì)分離技術(shù)介紹(已修改)
2025-01-24 07:51 本頁(yè)面
【正文】 Chapter 2 蛋白質(zhì) Chapter 2 蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)的概念、重要性及分類 氨基酸 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系 蛋白質(zhì)的性質(zhì) 蛋白質(zhì)的提取、分離和純化 蛋白質(zhì)的分離、純化 研究一個(gè)新的蛋白質(zhì)首先要從它的 基本性質(zhì) 作為突破口，然后 根據(jù)它的基本性質(zhì)進(jìn)行分離純化 ，最終用 純品 對(duì)其進(jìn)行分析鑒定。如果對(duì)蛋白質(zhì)的基本性質(zhì)尚未搞清楚，工作起來將會(huì)困難重重。 因此，蛋白質(zhì)研究技術(shù)主要是 對(duì)蛋白質(zhì)的基本性質(zhì)進(jìn)行的分析鑒定 。 研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和功能，首先需要得到純的蛋白質(zhì)樣品。 (1)蛋白質(zhì)來源：微生物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞； (2)分離和純化過程都必須 0－ 4℃ 的低溫 下進(jìn)行。 蛋白質(zhì)的分離、純化 1．蛋白質(zhì)的分離步驟 (1)生物組織的 機(jī)械破碎 。常用的方法有 研磨法、超聲波法、凍融法和酶解法 等。 (2)根據(jù)蛋白質(zhì)的特性，選擇不同的溶劑進(jìn)行抽提 。 水溶性蛋白用 中性緩沖溶液 抽提； 酸性蛋白用 稀堿性溶液 抽提； 脂溶性蛋白用 表面活性劑 抽提等。 (3)粗提 : 離心除去固體雜質(zhì)后，可通過鹽析、沉淀法、凝膠濾法、超過濾等處理，得到蛋白質(zhì)粗制品。 (4)精制 ：可用層析法、電泳法等進(jìn)行精制。 (5)成品 加工 ：測(cè)定蛋白質(zhì)的性質(zhì)并干燥成成品。 2．蛋白質(zhì)的純化方法 ? 透析是利用 蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜 ，而使它與 其它小分子化合物 ，如無機(jī)鹽、單糖、雙糖、氨基酸、小肽以及水等分離。 常用的半透膜是玻璃紙或稱賽璐玢紙、火棉紙和其它合成材料。膜有玻璃紙 或 高分子合成材料 ，截止分子量一般為 1萬(wàn) 。 （ 1）透析法（ dialysis) 凝膠過濾原理 當(dāng)不同大小的蛋白質(zhì)顆粒流經(jīng)凝膠柱時(shí)，比凝膠網(wǎng)孔大的分子不能進(jìn)入凝膠珠內(nèi)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而被排阻在凝膠珠外，隨著溶劑在凝膠珠之間的空隙向下移動(dòng)并最先流出柱外；比網(wǎng)孔小的分子能不同程度地自由出入凝膠珠的內(nèi)外。 大分子 小分
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