chapter 2 蛋白質(zhì)-3-蛋白質(zhì)分離技術(shù)介紹(文件)
【正文】 識(shí)別 和 結(jié)合能力 。 ③親和層析 2．蛋白質(zhì)的純化方法 + C C C 配基 蛋白質(zhì) 固體載體 在外電場(chǎng)的作用下，帶電顆粒將向著與其電性相反的電極移動(dòng)，這種現(xiàn)象稱(chēng)為 電泳 。主要用于蛋白質(zhì)亞基分子量的測(cè)定。 蛋白質(zhì)分子在還原劑作用下二硫鍵被還原 ， 將多聚體或單鏈折疊的蛋白質(zhì)分子的二硫鍵打開(kāi) ， 形成長(zhǎng)短不一的單鏈亞基 。 d. 聚丙烯酰胺凝膠分子篩作用 不同濃度的凝膠和交聯(lián)度，形成不同大小的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，它對(duì)蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物具有阻滯作用。 450 1mR lgMr 兔肌動(dòng)蛋白 牛血清白蛋白 兔磷酸化酶 牛碳酸酐酶 胰蛋白酶抑制劑 雞蛋清溶菌酶 ： 將未知蛋白的 Rf值查到 log(M)值 ， 便可知其分子量 。 影響結(jié)合的因素主要有三個(gè) : SDS單體的濃度 SDS在水溶液中以單體和 SDS復(fù)合物混合存在的 ， 能與蛋白質(zhì)結(jié)合的只能是單體 。 B. 樣品緩沖液離子強(qiáng)度 因?yàn)?SDS結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上的量取決于平衡時(shí) SDS單體濃度 ，而不是總濃度 ， 只有在較低的離子強(qiáng)度溶液中 ， SDS單體才具有較高的平衡濃度 ， 所以樣品緩沖液應(yīng)選用低離子強(qiáng)度 ， 通常是 10100mmol/l之間 。 ② 等電聚焦電泳 (isoelectric focusing, IEF ） a. 原理 : 通常是指聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳 。 (1)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) 蛋白質(zhì)屬于一種兩性電解質(zhì) 。 B 載電功能： 兩性電解質(zhì)作為電的載體 ， 具有運(yùn)載 “ 電流 ” 的能力 ，有良好的導(dǎo)電性能 水平板式電泳槽 垂直板式電泳槽 等電聚焦 時(shí)，蛋白質(zhì)混合物的分離是在具有 PH梯度的介質(zhì)中進(jìn)行的。 方法 : 制膠 ? 加樣 ? 電泳 ?固定 ? 染色 ? 脫色 ? 計(jì)算 等電聚焦 ③ 雙向電泳 （ twodimensional electroph
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1