chapter2蛋白質(zhì)-3-蛋白質(zhì)分離技術(shù)介紹-在線瀏覽
2025-03-01 07:51本頁(yè)面
【正文】 合成材料。 （ 1）透析法（ dialysis) 凝膠過(guò)濾原理 當(dāng)不同大小的蛋白質(zhì)顆粒流經(jīng)凝膠柱時(shí)，比凝膠網(wǎng)孔大的分子不能進(jìn)入凝膠珠內(nèi)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而被排阻在凝膠珠外，隨著溶劑在凝膠珠之間的空隙向下移動(dòng)并最先流出柱外；比網(wǎng)孔小的分子能不同程度地自由出入凝膠珠的內(nèi)外。 線性蛋白質(zhì)分子與球形分子比較 ， 同樣大小分子量的蛋白質(zhì) ， 線性分子體積大流速快 ， 球形分子體積小流速慢 。 此法是利用 離子交換劑 作為柱層析支持物，將帶有不同電荷的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離的方法。 帶正電荷多的蛋白質(zhì)與樹脂結(jié)合較強(qiáng)，而帶正電荷少的蛋白質(zhì)與樹脂結(jié)合則較弱。 ?離子交換層析 2．蛋白質(zhì)的純化方法 離子交換層析 這是一種 高效分離純化蛋白 的方法。 選擇與待純化蛋白質(zhì)具有特殊識(shí)別和結(jié)合作用的 配基 ，然后應(yīng)用化學(xué)方法將該 配基與載體共價(jià)連接 。 被特異性結(jié)合在層析柱上的蛋白質(zhì)，可以用適當(dāng)?shù)呐潴w洗脫液或高鹽溶液洗脫。 帶電的蛋白質(zhì)顆粒在電場(chǎng)中移動(dòng)的速度（ v）取決于電場(chǎng)強(qiáng)度 (E)， 所帶的凈電荷 (q)以及與介質(zhì)的摩擦系數(shù) (f)。 2．蛋白質(zhì)的純化方法 ① SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定法 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，也稱為十二烷基酸鈉 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (sodium dodecyl sulphatepolyacrylamide gel electrophoresis, SDSPAGE)。 (1)原理： 在自然狀態(tài)下蛋白質(zhì)通過(guò)二硫鍵聚合形成高度折疊的生物大分子 ，在水溶液中 ， 由于氨基酸殘基的解離作用使蛋白質(zhì)分子形成帶有一定凈電荷的分子 。 b. 還原劑的解聚作用 在蛋白溶液和分離凝膠介質(zhì)中加入還原劑 — ?巰基乙醇 (? mercaptoethanol)或二硫蘇糖醇 (Dithiothretiol, DTT)。 c. SDS的包裹作用 SDS分子中含有大量的帶負(fù)電的磺酸基 。 由于蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物所帶負(fù)電荷遠(yuǎn)大于蛋白質(zhì)分子自身有的凈電荷 ， 這樣就消除了不同分子之間
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