堿性磷酸酶米氏常數(shù)的測定(已修改)
2025-01-18 06:38 本頁面
【正文】 實(shí)驗(yàn)八 堿性磷酸酶米氏常數(shù)的測定 石 巍 一、目的要求 （ Km）及最大反應(yīng)速度（ Vm）的測定的原理和方法，測出堿性磷酸酶在以對硝基酚磷酸為底物時的 Km 和 Vm值。 二、原理 一 、 分光光度法的基本原理及方法 （ 一 ） 利用吸收光譜對物質(zhì)進(jìn)行定性分析 1． 原理 （ 二 ） 利用吸收光譜對物質(zhì)進(jìn)行定量分析 1． 原理 BeerLambert（ 比爾 ） 定律： T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=KCL 其中： T為透光率； A為吸光率； I0為入射光強(qiáng)度； I為透射光強(qiáng)度； K為吸收系數(shù)； C為溶液濃度； L為溶液光程的厚度 2． 常用方法 （ 1） 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 OD或Ａ 濃度 ? 標(biāo)準(zhǔn)曲線與樣品的測定條件必須一致。 （ 2） 標(biāo)準(zhǔn)管法 CX/AX=CS/AS， 已知 CS， 測定 AS、 AX， 可求得 CX。 （ 3） 摩爾吸光系數(shù)法 C=A/?（ ?為 L=1cm， C為 1mol/L時的吸光系數(shù) ， 也稱為摩爾吸光系數(shù) 。 (二 )米氏常數(shù)的測定 原理 酶促反應(yīng) v[S]曲線 v [S] 推導(dǎo)出米氏方程為：
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