堿性磷酸酶米氏常數(shù)的測(cè)定(完整版)
【正文】 各加 2mL 酶液（ mL ） 空白管 各補(bǔ)加 OD405 （三） 數(shù)據(jù)處理 各 管 在 722 分 光 光 度 計(jì) 測(cè) 定 波 長(zhǎng) 405nm 的 OD 值(OD405nm)。特別是同一種酶能夠作用于幾種不同底物時(shí)，米氏常數(shù) Km往往可以反映出酶與各種底物的親和力的強(qiáng)弱。 （ 2） 標(biāo)準(zhǔn)管法 CX/AX=CS/AS， 已知 CS， 測(cè)定 AS、 AX， 可求得 CX。 三、操作方法 （ 一 ） 對(duì)硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取 5支試管編號(hào) ,0號(hào)一支 ,1－ 7號(hào)各二支 ,按下表操作： 管 號(hào) 0 1 2 3 4 5 6 pNP含量 (?mol) 0 ?mol/mL pNP (mL) 0 H2O (mL) Na2CO3NaHCO3 (mL) 各管加入 mL 20 mmol/L MgCl2 (mL) 各管加入 mL mol/L NaOH (mL) 各管加入 mL OD 405 nm ? 以對(duì)硝基苯酚的絕對(duì)量
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