堿性磷酸酶米氏常數(shù)的測(cè)定-文庫(kù)吧
2024-12-22 06:38 本頁(yè)面
【正文】 其中 [S]為底物濃度； v為初速度； Vm為最大反應(yīng)速度；Km 為米氏常數(shù) ][][SKSVvmm?? 米氏常數(shù) Km是酶的一個(gè)基本特征常數(shù)，它包含著酶與底物結(jié)合和解離的性質(zhì)。特別是同一種酶能夠作用于幾種不同底物時(shí)，米氏常數(shù) Km往往可以反映出酶與各種底物的親和力的強(qiáng)弱。 測(cè)定 Km和 Vm，可通過(guò)作圖法求得。 最常用的LineweaverBurk雙倒數(shù)作圖法。這個(gè)方法是將米氏方程轉(zhuǎn)化為倒數(shù)形式，即 ： 以 1/v對(duì) 1/[S]作圖，可得一條直線 mmmVSVKv1][11 ??? 1/v 1/Vm 1/Km 1/[S] ? 本實(shí)驗(yàn)測(cè)定堿性磷酸酶催化對(duì)硝基苯磷酸鈉鹽 (pNPP)水解的 Km和 Vm. ? 反應(yīng)式： pNPP+H2O pNP+HPO42 無(wú)色 黃色 可通過(guò)分光光度法測(cè)定產(chǎn)物 pNP的含量，求出反應(yīng)速度v。 二、分光光度計(jì)的使用 儀器操作鍵介紹 “方式設(shè)定”鍵（ MODE）：用于設(shè)置測(cè)試方式 —— 透射比（ T）、吸光度（ A）、已知樣品濃度值（ C）、已知標(biāo)
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