堿性磷酸酶米氏常數(shù)的測定-免費閱讀
【正文】 3 3 39。 以 1/v對 1/[S]作圖 ， 求出酶催化 pNPP水解的米氏常數(shù) Km和最大反應(yīng)速度Vm。 最常用的LineweaverBurk雙倒數(shù)作圖法。實驗八 堿性磷酸酶米氏常數(shù)的測定 石 巍 一、目的要求 （ Km）及最大反應(yīng)速度（ Vm）的測定的原理和方法，測出堿性磷酸酶在以對硝基酚磷酸為底物時的 Km 和 Vm值。這個方法是將米氏方程轉(zhuǎn)化為倒數(shù)形式，即 ： 以 1/v對 1/[S]作圖，可得一條直線 mmmVSVKv1][11 ??? 1/v 1/Vm 1/Km 1/[S] ? 本實驗測定堿性磷酸酶催化對硝基苯磷酸鈉鹽 (pNPP)水解的 Km和 Vm. ? 反應(yīng)式： pNPP+H2O pNP+HPO42 無色 黃色 可通過分光光度法測定產(chǎn)物 pNP的含量，求出反應(yīng)速度v。 四 注意事項 1. 取液量一定要準(zhǔn)確 。 4 4 39。 2 2 39。 從對硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出 OD405nm相當(dāng)于產(chǎn)物對硝基苯酚的含量 (?mol數(shù) ),計算出各種底物濃度下的初速度 vo（ 單位以 ?mol?L
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