【正文】 mL mol/L NaOH (mL) 各管加入 mL OD 405 nm ? 以對硝基苯酚的絕對量 (?mol數(shù) )為橫坐標(biāo) ， OD405nm值為縱坐標(biāo) ， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。特別是同一種酶能夠作用于幾種不同底物時，米氏常數(shù) Km往往可以反映出酶與各種底物的親和力的強弱。 6. 移液管或 取液器的使用 7. 比色杯的使用 返回 管號 1 139。 2. 反應(yīng)時間 一定要精確 。 二、原理 一 、 分光光度法的基本原理及方法 （ 一 ） 利用吸收光譜對物質(zhì)進(jìn)行定性分析 1． 原理 （ 二 ） 利用吸收光譜對物質(zhì)進(jìn)行定量分析 1． 原理 BeerLambert（ 比爾 ） 定律： T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=KCL 其中： T為透光率； A為吸光率； I0為入射光強度； I為透射光強度； K為吸收系數(shù)； C為溶液濃度； L為溶液光程的厚度 2． 常用方法 （ 1） 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 OD或Ａ 濃度 ? 標(biāo)準(zhǔn)曲線與樣品的測定條件必須一致。 從對硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出 OD405nm相當(dāng)于產(chǎn)物對硝基苯酚的含量 (?mol數(shù) ),計算出各種底物濃度下的初速度 vo（ 單位以 ?mol?L1?min1表示 ） ， 取倒數(shù) 1/v填入表內(nèi) 。 4 4 39。這個方法是將米氏方程轉(zhuǎn)化為倒數(shù)形式，即 ： 以 1/v對 1/[S]作圖，可得一條直線 mmmVSVKv1][11 ?