白血病淋巴瘤免疫分型(已修改)
2025-01-18 06:35 本頁(yè)面
【正文】 1 白血病 /淋巴瘤免疫分型 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院 江蘇省血液研究所 衛(wèi)生部 血栓與止血重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 朱明清 2022年 8 月 杭州 2 流式細(xì)胞術(shù)的基本概念 ? 流式細(xì)胞術(shù)（ Flow Cytometry, 簡(jiǎn)稱 FCM）是一種可以快速、準(zhǔn)確、客觀，并且同時(shí)檢測(cè)單個(gè)微粒（通常是細(xì)胞）的多項(xiàng)特性的技術(shù)，同時(shí)可以對(duì)特定群體加以分選 ? 研究對(duì)象為生物顆粒，如各種細(xì)胞、微生物及人工合成微球等 ? 研究的微粒特性包括多種物理及生物學(xué)特征，并加以定量 3 散射光信號(hào)和熒光信號(hào) ? 前向角散射光（ FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信號(hào) 細(xì)胞相對(duì)大小及其表面積 ? 側(cè)向角散射光（ SSC, Side Scatter） 入射激光 90?角的 散射光信號(hào) 細(xì)胞粒度及細(xì)胞內(nèi)相對(duì)復(fù)雜性 ? 熒光素與特異抗體結(jié)合，熒光抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合越多，產(chǎn)生的熒光信號(hào)越強(qiáng)。 4 CD45/SS示意圖 5 實(shí)驗(yàn)對(duì)照的設(shè)計(jì) ? 空白對(duì)照： ALL ? 陰性對(duì)照： 常用同型抗體對(duì)照 單色分析：設(shè)同型抗體對(duì)照 多色分析：同型對(duì)照，單陽(yáng)性對(duì)照 （用于儀器校正） ? 陽(yáng)性對(duì)照： 檢測(cè)陰性時(shí) 6 空白對(duì)照和陰性對(duì)照的比較： 7 ? 需要用多少的標(biāo)志來(lái)確證感興趣的細(xì)胞群 ? ? 它們?cè)诩?xì)胞上的分布是不是很近 ? ? 它們是否在不同的細(xì)胞上表達(dá)不同 ? ? 他們表達(dá)強(qiáng)還是弱 ? 抗原表達(dá) CD3 CD4 CD3 CD8 8 抗原分布 ? 表面 ,胞漿 ,核內(nèi) ? 是共同檢測(cè)還是分別檢測(cè) ? 表面 胞漿 核內(nèi) CD3, CD4, CD8, tetramer cytokines DNA CD3,4,8, tetramer + Cytokines CD3,4,8, tetramer + DNA Cytokines + DNA CD3,4,8, tetramer + Cytokines + DNA 9 設(shè)門 0803307 10 設(shè)門 全部 細(xì) 胞 門 內(nèi) 細(xì) 胞 0803307 11 12 A S C P ( 美國(guó)臨床病理學(xué)家協(xié)會(huì)) 流式臨床應(yīng)用調(diào)查020406080100120140CD4LeukLymphCD34DNA MDSRetB27MitoNFPlat流式臨床應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室數(shù)目(個(gè))13 血液腫瘤分類進(jìn)程 14 目前最完善的血液腫瘤免疫分型文獻(xiàn) 15 白血病免疫分型的理論基礎(chǔ) 白血病 /淋巴瘤免疫分型采用的抗原標(biāo)志是表達(dá)于正常造血細(xì)胞不同分化發(fā)育階段的分化抗原。雖然是惡性腫瘤細(xì)胞，但仍能表達(dá)正常血細(xì)胞所具有的抗原，因而仍可依據(jù)其抗原的表達(dá)譜對(duì)白血病 /淋巴瘤進(jìn)行免疫分型。為了正確分析白血病 /淋巴瘤細(xì)胞，必須對(duì)正常造血細(xì)胞分化抗原的表達(dá)模式有充分的了解。只有熟悉正常細(xì)胞的抗原表達(dá)模式，才能辨認(rèn)白血病 /淋巴瘤細(xì)胞的存在。 16 細(xì)胞類型鑒定 Borowitz et al (1993) AJCP 100:53440. Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265280 17 CD45/SS示意圖 正常骨髓細(xì)胞 血液腫瘤細(xì)胞 老化粒細(xì)胞 、噬酸細(xì)胞 早幼 — 成熟粒細(xì)胞 M CML 單核細(xì)胞 M M5 LGL 淋巴細(xì)胞 CLL、 ALL、 CLD 正常前體細(xì)胞 M0、 M M 嗜堿性粒細(xì)胞 M M ALL 成熟紅細(xì)胞、血小板 M M MM 細(xì)胞碎片 PreBALL 非血液來(lái)源細(xì)胞 18 B淋巴細(xì)胞分化與抗原表達(dá)關(guān)系圖 Wood and Borowitz (2022) Henry’s Laboratory Medicine 19 T淋巴細(xì)胞分化與抗原表達(dá)關(guān)系圖 Wood and Borowitz (2022) Henry’s Laboratory Medicine 20 粒細(xì)胞分化與抗原表達(dá)關(guān)系圖 Wood and Borowitz (2022) Henry’s Laboratory Medicine 21 單核細(xì)胞分化與抗原表達(dá)關(guān)系圖 Wood and Borowitz (2022) Henry’s Laboratory Medicine 22 非腫瘤 T淋巴細(xì)胞表型 23 非腫瘤 B淋巴細(xì)胞表型 24 非腫瘤粒細(xì)胞、單核細(xì)胞表型 25 非腫瘤粒細(xì)胞、單核細(xì)胞表型 26 白血病免疫分型 ? 根據(jù)白血病細(xì)胞表達(dá)的系列相關(guān)抗原，確定其系列來(lái)源。如：淋系 T/B、粒單系、紅系、巨核系等。 ? 根據(jù)白血病細(xì)胞表達(dá)的系列分化其相關(guān)抗原進(jìn)一步分型。如：早前 B，前 B，普通 B… 27 EGIL， 1998年白血病積分系統(tǒng) ? 分值 B系 T系 髓系 ? 2 CD79a CD3 MPO ? (cyt)CD22 TCRα/β ? (cyt)IgM TCRγ/δ ? 1
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