【正文】 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 第 4節(jié) 黃酮類化合物的色譜檢識(shí) 一． 紙色譜（ PC） 二． 薄層色譜（ TLC） 三． 紙電泳（ PE） 四． 高效薄層色譜（ HPTLC） 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 一、紙色譜（ PC） 雙向紙色譜層析：分離黃酮及黃酮苷 第一向：醇性展開劑，如 nBuOHHOAcH2O（ 4： 1： 5，上層， BAW ）、 tBuOHHOAcH2O（ 3： 1： 1， TBA ） 、水飽和正丁醇 等 正相，極性小的化合物 Rf值大。適合游離黃酮。 第二向：水性展開劑 ， 如水 、 2～ 5％ 乙酸等 。 反相 ， 極性大的化合物 Rf值大 。 適合黃酮苷 。 顯色： UV、 UV/AlCl UV/NH3等 。 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY BAW（ 4:1:5,上層） 第一向：醇性展開劑 黃酮苷 黃酮苷元 90176。 第二向：水性展開劑 2％乙酸 黃酮苷元 黃酮苷 一、紙色譜（ PC） 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 二、 薄層色譜法（ TLC） （ 1）硅膠：適用于極性小的弱酸性黃酮類化合物。 展開劑：多用有機(jī)溶劑，如氯仿 /甲醇。 （ 2）聚酰胺：游離黃酮苷元及其苷。 展開劑：極性強(qiáng)，大多含醇、酸或水。 （ 3）纖維素：分離黃酮苷元及苷。 展開劑：醇性或水性。 顯色： UV、 UV/AlCl UV/NH3等 。 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 第 5節(jié) 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)測(cè)定 一、紫外光譜（ UV） 二、紅外光譜（ IR） 三、質(zhì)譜（ MS） 四 、核磁（ NMR） 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 原理： 是分子中某些 價(jià)電子 吸收了一定波長的電磁波 ,由 低能級(jí) 躍近到 高能級(jí) 而產(chǎn)生的一種光譜 。 引起 分子中電子能級(jí)躍遷光波波長范圍： 100800 nm. λmax： 躍遷電子的能級(jí)差 εmax： 電子躍遷的機(jī)率 一、紫外光譜（ UV） 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 一、紫外光譜（ UV） 類型： ζζ* 150nm n ζ* 150 ～ 250nm (N,O) ππ* 160 ～ 200nm (非共軛 ) n π* 280 ～ 300nm 常見化合物 共軛烯烴 ： ππ*， 210 ～ 270nm， K帶， ε≥104 α,β不飽和醛酮 ： nπ*， 290 ～ 310nm， R帶， ε=10100 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 常用術(shù)語 生色團(tuán) ：分子中產(chǎn)生所示譜帶的主要功能團(tuán)。 助色團(tuán) ：與生色團(tuán)相連使生色團(tuán)波長紅移且強(qiáng)度增大。 紅（紫）移 ：基團(tuán)或溶劑的影響，波長增大（減?。?。 增色效應(yīng) ：溶劑或助色團(tuán)影響，吸收強(qiáng)度增大的效應(yīng)。 減色效應(yīng) ：取代或溶劑的影響，吸收強(qiáng)度減小的效應(yīng)。 溶劑效應(yīng) ：不同溶劑中譜帶產(chǎn)生的位移。 末端吸收 ：在儀器極限處測(cè)出的吸收。 肩峰 ：吸收曲線在下降或上升處有停頓或增加或降低。 一、紫外光譜（ UV） 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY OOOO+_+_AB 黃酮類存在 桂皮?；?及 苯甲酰基 組成的交叉共軛體系 ,在 200～400nm間，有兩個(gè)主要的紫外吸收帶。 ?黃酮類化合物的 UV光譜 OOABCB環(huán) 桂皮酰系統(tǒng) 帶 I： 300 ～ 400 nm A環(huán) 苯甲酰系統(tǒng) 帶 II： 240 ～ 285 nm 一、紫外光譜（ UV） 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY OO苯 甲 酰 基 I I2 4 0 2 8 0 n m桂 皮 酰 基 I3 0 0 4 0 0 n mABCOO－ABC＋OO－ABC＋? 判斷黃酮類型 (峰位、吸收強(qiáng)度 ) 黃酮（醇）：帶 Ⅰ 、帶 Ⅱ 二氫黃酮、異黃酮： 帶 Ⅰ 弱， 帶 Ⅱ 強(qiáng) 查耳酮、橙酮 ：帶 Ⅰ 強(qiáng)， 帶 Ⅱ 弱 一、紫外光譜（ UV） OOH OO HH OOOH OO HH OOOH OO HH OOOO HH OO HH OO HOO HH OH OO HOC HOH OOH OH OO － r h a+O H169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 診斷試劑 ： 能使黃酮的酚 OH離解或形成絡(luò)合物 ，導(dǎo)致 UV光譜變化 ， 對(duì)判斷結(jié)構(gòu)有診斷意義的試劑 。 如 NaOMe、 NaOAc、NaOAcH3BO AlCl AlCl3/HCl等 。 一、紫外光譜（ UV） 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 帶 Ⅱ （ nm） 帶 Ⅰ （ nm） 黃 酮 類 型 250～ 280 304～ 350 黃 酮 250～ 280 328～ 357 黃酮醇（ 3O苷） 250～ 280 358～ 385 黃酮醇（ 3OH游離） （一） 黃酮、黃酮醇類 UV光譜 ? 黃酮（醇） 在甲醇中的 UV光譜特征 OOO HH OO HOOO HH OO HO H169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY （一） 黃酮、黃酮醇類 （ 1） 黃酮與黃酮醇 UV圖形相似，僅帶 Ⅰ 位置不同，可用于區(qū)別。 黃酮： 304350 nm 黃酮醇： 352385nm（游離）， 328357nm（成苷） 判斷 C3OH 的有無 有 C3OH BandⅠ λmax ＞ 350 nm C3O糖苷 BandⅠ λmax ＜ 350 nm 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY （ 2） A、 B環(huán)上的取代基影響相應(yīng)的吸收峰峰位和峰形 如含氧取代基，會(huì)使相應(yīng)吸收帶紅移。 A環(huán) ： 7OH、 OCH3， Ⅱ 紅移 5OH， Ⅰ 、 Ⅱ 均紅移 B環(huán) ： 4’OH或 OCH 3OH， Ⅰ 紅移 若有鄰二酚 OH，會(huì)使帶 Ⅱ 歧分，出現(xiàn)肩峰。 （ 3）母核上 OH苷化，會(huì)引起相應(yīng)吸收帶紫移，特別是帶 Ⅰ 。 （一） 黃酮、黃酮醇類 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY （一） 黃酮、黃酮醇類 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY ? 利用診斷試劑對(duì)黃酮（醇） UV光譜的影響檢出羥基位置 1. 甲醇鈉（ NaOMe） 2. 乙酸鈉（ NaOAc ） /硼酸（ NaOAc/H3BO3 ） 4. 三氯化鋁及三氯化鋁 /鹽酸（ AlCl3 與 AlCl3/HCl ） （一） 黃酮、黃酮醇類 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY （一） 黃酮、黃酮醇類 （ NaOMe） 堿性強(qiáng)，使所有酚 OH解離，促進(jìn)電子躍遷，使相應(yīng)帶紅移 （ 1） Ⅰ 紅移 4065nm，強(qiáng)度 不變或增強(qiáng) ，有 4’OH。 （ 2） Ⅰ 紅移 5060nm，強(qiáng)度 減弱 ，有 3OH（無 4’OH） （ 3） 7OH， Ⅱ 紅移 。且 在 320330nm有 新吸收帶 ,成苷后消失 （ 4）含 3,4’、 3,3’,4’、 5,3’,4’、 5,6, 5,7,8OH的黃酮類，在NaOMe作用下易氧化破壞，吸收帶隨測(cè)定時(shí)間延長而 衰退 。 （ 確定 4’OH ） OOH OO HO HO HO H169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY （一） 黃酮、黃酮醇類 2. 乙酸鈉（ NaOAc ） 堿性比甲醇鈉小，僅使 4’OH解離，相應(yīng)吸收帶紅移。 （ 1） 7OH， 帶 Ⅱ 紅移 520nm； 若 8同時(shí)有含氧基， Ⅱ 紅移很?。◣缀醪晃灰疲? （ 2） 4’OH，帶 Ⅰ 紅移 4065nm（與 MeONa相同）。 （ 3）存在堿敏感結(jié)構(gòu)時(shí)，如含 3,4’、 3,3’,4’、 5,6, 5,7,8 OH的黃酮類，吸收帶隨測(cè)定時(shí)間延長而衰退。 （ 確定 7OH） OOH OO HO HO HO H169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY （一） 黃酮、黃酮醇類 /硼酸（ NaOAc/H3BO3 ） 母核上有鄰二酚 OH，堿性下可與硼酸絡(luò)合，使相應(yīng)帶紅移。 A環(huán)： Ⅱ 紅移 510nm（不含 5,6OH） B環(huán)： Ⅰ 紅移 1230nm OOOBO O HO HOOH OO HO HO HO H（確定鄰二酚 OH） 169。2022 SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 4. 三氯化鋁及三氯化鋁 /鹽酸（ AlCl3 與 AlCl3/HCl ） 鋁鹽可與 5OH,4C=O、 3OH,4C=O、鄰二酚 OH絡(luò)合，紅移；若絡(luò)合物不穩(wěn)定，加酸分解。 絡(luò)合物的穩(wěn)定性： 3OH 5OH 鄰二酚 OH H C l / H 2 OA l C l 3A l3 +OOO HO HOH OA l