第五章酶動力學(xué)引論(已修改)
2025-10-22 12:16 本頁面
【正文】 第五章 酶動力學(xué)引論 ? 底物濃度 ? 酶濃度 ? pH ? 溫度 ? 激活劑 ? 抑制劑 主要內(nèi)容 —— 研究各因素對酶催化反應(yīng)速度的影響 酶催化應(yīng)速度與底物濃度的關(guān)系 p203 酶催化反應(yīng)進程曲線 0510150 50 100 150 200 250 300水解時間(min)DH(%)537酸性蛋白酶，50℃，pH3,E/S=4%（酶與底物的濃度之比）AS1398中性蛋白酶50℃，pH7,E/S=2%胰蛋白酶37℃，pH8,E/S=4%胰酶37℃，pH8,E/S=4%Alcalase60℃,pH8,E/S=12AU(安森單位)/Kg木瓜蛋白酶，60℃,pH5,E/S=10%Protamex50℃,E/S=24AU/Kg一底物或其他底物濃度不變時適用 反應(yīng)出現(xiàn)平衡的原因 05101520250 100 200 300水解時間（ min ）水解度DH%E+S ES E+P1+P2 Note p2 米氏方程 V=Vmax[S]/(Km+[S]) V = Kcat[E]t[S] /(Km + [S]) Kcat: 催化常數(shù)（酶的轉(zhuǎn)化數(shù)） 每秒種每個酶分子轉(zhuǎn)換底物的微摩爾數(shù) Kcat/Km: 專一性常數(shù) Km, Kcat, and kcat /Km 米氏方程的意義 ? 米氏常數(shù)為反應(yīng)速度是最大反應(yīng)速度一半時的底物濃度， Km單位為摩爾濃度（ mol/L） ? Km對于特定的反應(yīng)條件而言是一個特征常數(shù)。它只與酶的性質(zhì)有關(guān)而與酶的濃度無關(guān)，不同的酶，具有不同的 Km值。 ? Km值作為常數(shù)只是對固定的底物、一定的溫度、一定的 pH等條件而言的。 ? Km值可以反映酶同底物的親和力。 Km在實際應(yīng)用中的作用 ? 鑒定酶 ? 判斷酶的最適底物 ? 計算一定反應(yīng)速度下的底物濃度 ? 了解酶的底物在體內(nèi)具有的濃度水平 ? 判斷反應(yīng)方向或趨勢 ? 判斷抑制類型 是否復(fù)合 MM方程 Note part210 某酶促反應(yīng)遵從 MichaelisMenten動力學(xué)，酶的 Km為 104mol/L，當(dāng)?shù)孜餄舛葹?，其反應(yīng)速度為 128?mol毫升 1分鐘 1，若底物濃度為 104mol/L后，其反應(yīng)速度為多少？ 如果一酶促反應(yīng) [S]=m， 則 V值等于多少 Vmax? 米氏方程的求法 LineweaverBurk plot An EadieHofstee plot v=Km(v/[S])+Vmax Random substrate binding （隨機機制） Ordered substrate binding （有序機制） 雙底物反應(yīng)的反應(yīng)機理 N 12 The pingpong mechanism eg. chymotrypsin Enzyme kiics experiment 酶濃度反應(yīng)初速度條件： 無干擾因素存在 ， [S]Km 應(yīng)用：酶活力測定（在一定時間內(nèi)產(chǎn)物的數(shù)量與酶濃度呈正比） S： 8%， pH9， T=60℃ 051015200 50 100 150 200 250 300水解時間( m i n )DH(%)E/S=12AU/KgE/S=24AU/Kg添加不同量的 Alcalase水解絲素的酶解進程曲線 pH對酶催化反應(yīng)的影響 ? 影響酶的穩(wěn)定性 ? 影響酶與底物的結(jié)合以及酶催化底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物 Note p1921 環(huán)境酸堿度影響蛋白質(zhì)的凈電荷 Juang RH (2004) BCbasics + Net Charge of a Protein Buffer pH Isoelectric point, pI 3 4 5 6 7 8 9 10 0 影響酶的 pH穩(wěn)定
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