【正文】 順 序 號 類 別 A 申報學(xué)科代 碼 1 H0906 廣東省自然科學(xué)基金 項目 自由申請 申 請 書 項 目 名 稱： cMaf調(diào)控 IL4參與多發(fā)性硬化發(fā)病的分子機(jī)制研究 申 請 者： 高聰 所 在 單 位： 廣州醫(yī)學(xué)院 第二附屬醫(yī)院 神經(jīng)科學(xué)研究所 郵 政 編 碼： 510260 通 訊 地 址： 廣州市 海珠區(qū) 昌崗東路 250號 申請者電話： 13005172928 傳 真： 電 子 郵 件： 申 請 日 期： 20xx32 廣 東 省 自 然 科 學(xué) 基 金 管 理 委 員 會 二○○八 年 制 填 報 說 明 一、填寫申請書前 ，請先查閱廣東省自然科學(xué)基金有關(guān)項目申 請 辦法及規(guī)定。申請書各 項內(nèi)容 ，應(yīng)實(shí)事求是，逐 條認(rèn)真 填寫。表 達(dá)要明確、嚴(yán)謹(jǐn)，字跡清晰易辨。外來語要同時用原文和中文表 達(dá) 。第一次出現(xiàn)的縮寫詞 ，須注出全稱。 二、申請書第三 頁起各欄空格 不夠時，請自行加頁 。 三、封面右上角“順序號” 暫不用填 寫；“項目類別”欄由申 請者填寫 , 申請“省自然科學(xué)基金自由申請項目”此欄為“ A” , “省 自然科學(xué)基金重點(diǎn)項目”為“ B”。 1 一、簡表 研究項目情況 名稱 cMaf 調(diào) 控 IL4 參 與 多 發(fā) 性 硬 化 發(fā) 病 的 分 子 機(jī) 制 研 究 類別 A. 自由申請項目 研究類型 A. 基礎(chǔ)研究 B. 重點(diǎn)項目 A B. 應(yīng)用基礎(chǔ)研究 B 申報學(xué)科 名稱 1 神經(jīng)免疫疾病 代碼 1 H0907 名稱 2 代碼 2 申 請 金額 10 萬元 研究期限 20xx 年 1 月至 20xx 年 12 月 所用實(shí)驗(yàn)室 實(shí)驗(yàn)室全稱 廣州醫(yī)學(xué)院神經(jīng)科學(xué)研究所 實(shí)驗(yàn)室類別 A. 國家重點(diǎn) B. 部門開放 實(shí)驗(yàn)室 編號 C. 省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 C 申請者情況 姓名 高聰 性別 A. 男 身份號碼 440105195808014520 民族 名稱 漢 B. 女 B 代碼 01 專業(yè)技術(shù)職務(wù) 名稱 教授 學(xué)位 最終學(xué)位授予國 國 (地區(qū) )名 中國 其他身份 A. 院士 □ B. 博 士 生 導(dǎo) 師 □ C. 在 站 博 士 后 □ D. 留學(xué)回國人員□ 代碼 011 C 代碼 86 所在單位 全稱 廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 系 (所 )及科室 神經(jīng)科學(xué)研究所 神經(jīng)內(nèi)科 項目組情況 主要成員（不含申請者） 姓名 身份證號碼 專業(yè)技術(shù)職務(wù) 所在單位全稱及代碼 項目中 的分工 簽章 梁兵 37028119780803265X 講師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 納 米 材 料的合成 周智美 440105197801294522 講師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 細(xì) 胞 學(xué) 實(shí)驗(yàn) 蒲蜀湘 430105196501233027 主任 醫(yī)師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 免疫組化 袁芳 430204198301094024 醫(yī)師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 基因轉(zhuǎn)染 張斌 140104197811302736 講師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 動 物 模 型建立 侯清華 420xx4197603121612 講師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 文章撰寫 譚麗華 440105196408192429 主管技師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 統(tǒng)計分析 林美 容 441702198406184285 碩士生 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 病 理 學(xué) 實(shí)驗(yàn) 占婷婷 360281198401095221 碩士生 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 分 子 生 物學(xué)實(shí)驗(yàn) 人員統(tǒng)計 總?cè)藬?shù) 高級 中級 初級 在站博士后 在讀博士 生 在讀碩士 生 參加單位數(shù) 10 2 5 1 2 1 2 3 研 究 內(nèi) 容 和 意 義 摘 要 我們最新的研究 發(fā)現(xiàn) cMaf 在 多發(fā)性硬化（ MS） 病人中表達(dá) 降低 ，提示其與 MS 發(fā)病相關(guān)； 同時發(fā)現(xiàn) IL4的 表達(dá) 也降低 ，提示我們 IL4和 cMaf同時 參與 MS發(fā) 病。 cMaf具有轉(zhuǎn)錄因子的作用，可以控制下游基因的轉(zhuǎn)錄，從而發(fā)揮其功能， 但 cMaf 參與 MS 發(fā)病的具體分子機(jī)制并不十分明確。 本項目在前期研究和文獻(xiàn)挖掘的基礎(chǔ)上，推測 cMaf通過去甲基化組蛋白調(diào)控 IL4與 MS發(fā)病 。為了驗(yàn)證這一假設(shè)，我們一方面檢測 IL4和 cMaf在 MS血液和 腦脊液 中的相關(guān)性表達(dá)及其表達(dá)失調(diào)對 多發(fā)性硬化發(fā)展 的影響，另一方面證實(shí) cMaf通過組蛋白 去 甲基化修飾 促進(jìn) IL4轉(zhuǎn)錄從而 增加 該基因表達(dá) 。 cMaf表達(dá) 降低導(dǎo)致 IL4的 表達(dá)也降低， 從而導(dǎo)致 MS 發(fā)病 。 本項目如獲成功 ，不但為 多發(fā)性硬化 發(fā)生機(jī)理提供新的理論依據(jù)，還將為尋找 多發(fā)性硬化 的分子標(biāo)志物和基因治療的新靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 主題詞 （主題詞應(yīng)反映研究內(nèi)容，主題詞數(shù)量不多于三個，各主題詞之間以逗號分隔） 多發(fā)性硬化 ， cMaf， IL4， 簡 表 填 寫 要 求 一 、 簡 表 內(nèi) 容 必須逐項認(rèn)真填寫，采用國家公布的標(biāo)準(zhǔn)簡化漢字。簡表中所有代碼，以國家自然科學(xué)基金規(guī)定的代碼為準(zhǔn)填寫。 二、凡選擇性欄目，將相應(yīng)提示符Ａ、Ｂ等之一填入該欄的右下角。 三、部分欄目填寫要求： 項目名稱──應(yīng)確切反映研究內(nèi)容和范圍，最多不超過２５個漢 字（包括標(biāo)點(diǎn)符號）。 基礎(chǔ)研究──指以認(rèn)識自然現(xiàn)象、探索自然規(guī)律為目的，不直接考慮應(yīng)用目標(biāo)的研究活動。 應(yīng)用基礎(chǔ)研究──指有廣泛應(yīng)用前景 ,但以獲取新原理、新知識、新方法為主要目的的研究。 申報學(xué)科──申請項目所屬的最基礎(chǔ)學(xué)科。 如涉及多學(xué)科可填寫兩個，先填寫主學(xué)科。 申請金額──以萬元為單位，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示。 研究期限──研究期限一般從申請的次年１月算起。終止時間為完成年度的１２月。 所用實(shí)驗(yàn)室──系指研究項目將利用的實(shí)驗(yàn)室。 留學(xué)回國人員 —— 指在國外取得學(xué)位或訪問學(xué)者一年以上的回國人員。 所在單位名稱及 代碼──按單位公章填寫全稱。首次申請廣東省自然科學(xué)基金的單位，尚未編入單位代碼，其代碼應(yīng)向廣東省自然科學(xué)基金管理委員會辦公室申請后填寫。 參加單位數(shù)──指研究項目組主要成員所在單位數(shù)，包括主持單位和合作單位 (合作者所在單位 )，以阿拉伯?dāng)?shù)字表示。 項目組主要成員──指在項目組內(nèi)對學(xué)術(shù)思想、技術(shù)路線的制訂與理論分析及對項目的完成起重要作用的人員，本人應(yīng)在申請書上親自簽名。 4 二、立論依據(jù) 請按以下提綱填寫： 研究意義（對基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合國際科學(xué)發(fā)展趨勢，論述項目的科學(xué)意義；對應(yīng)用基礎(chǔ)研究，著重 結(jié)合學(xué)科前沿、圍繞國民經(jīng)濟(jì)和社會發(fā)展中的重要科技問題，論述其應(yīng)用前景） 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 本項目的創(chuàng)新之處 主要參考文獻(xiàn)及出處（格式：論文 —— 作者．題目．刊名．年份．卷 (期 )．頁碼／專著 —— 作者．書名．出版者．年份） 研究意義 多發(fā)性硬化（ Multiple Sclerosis， MS）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥性脫髓鞘性疾病 ， 其特征表現(xiàn)為脫髓鞘、局部 T 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤、軸突損害 及 神經(jīng)功能喪失 ， 迄今尚未明確其病因和發(fā)病機(jī)制，也尚無公認(rèn)的根治性措施， 因此，全面解析多發(fā)性硬化發(fā)病的分子機(jī)制，積極尋求切 實(shí)有效且安全可靠的治療新途徑，是有效控制多發(fā)性硬化從而提高患者生存質(zhì)量的關(guān)鍵 [1]。 關(guān)于多發(fā)性硬化的發(fā)病機(jī)制，最初的研究提示其與病毒等（外因）通過感染易感個體（內(nèi)因） 啟動其自身免疫應(yīng)答有關(guān)。目前，已能在基因 (microRNA 等 )、蛋白和分泌的細(xì)胞水平測定細(xì)胞因子，了解病灶的細(xì)胞、蛋白和 mRNA 水平變化，這將有助于進(jìn)一步了解 多發(fā)性硬化 發(fā)病機(jī)制和處于疾病哪一階段 [2]。 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 隨著對分子生物學(xué)的深入研究和生物技術(shù)的飛速發(fā)展，在各種基因工程細(xì)胞因子、分子靶向類藥物和治療性抗體通過美國 FDA 認(rèn)證成功上市，并應(yīng)用于臨床后， 基因治療再次成為萬眾矚目的焦點(diǎn)。近三年來，基于 多發(fā)性硬化 的基因治療研究層出不窮 [3]。 為了探尋 多發(fā)性硬化 的發(fā) 病 機(jī)理，項目申請人所在的研究團(tuán)隊一直致力于篩選并鑒定調(diào)控 多發(fā)性硬化 發(fā) 病 的關(guān)鍵基因。在前期研究中，通過基因芯片技術(shù)篩選出多個與 多發(fā)性硬化 發(fā) 病 密切相關(guān)的候選基因 。 我們 發(fā)現(xiàn) 在 15 例多發(fā)性硬化病人的血液和腦脊液 PBMC 中 cMaf mRNA 和蛋白水平的表達(dá)下降， 該結(jié)果提示我們 cMaf 可能 在多發(fā)性硬化的 發(fā) 病機(jī)制中發(fā)揮重要作用 。 為此 ，我們首次針對 cMaf 在 多發(fā)性硬化 中的表達(dá)和功能進(jìn)行了一部分預(yù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明利用 siRNA 干擾 cMaf 的表達(dá)后， 免疫 細(xì)胞 因子 IL4 的 表達(dá)水平顯著下降 ，提示我們 cMaf 的表達(dá)失調(diào)參與了 多發(fā)性硬化的 發(fā) 病 ，但 cMaf 的下游基因是什么？又通過何種機(jī)制參與多發(fā)性硬化發(fā)??？還知之甚少。 此外，經(jīng)文獻(xiàn)檢索未發(fā)現(xiàn)有關(guān) cMaf 在 多發(fā)性硬化 中的表達(dá)特性和功能研究的相關(guān) 5 報道。 由于 cMaf 的作用方式主要是通過 CpG 島去 甲基化修飾，激活下游基 因 啟動子從而實(shí)現(xiàn)基因 轉(zhuǎn)錄 ， 因此，為了進(jìn)一步明確 cMaf 參與 多發(fā)性硬化發(fā)病 的分子機(jī)制，我們希望找到 cMaf 直接調(diào)控的下游基因。在挖掘文獻(xiàn)的過程中， 細(xì)胞因子白介素4（ interleukin4, IL4） 吸引了我們的注意力 [4]。 轉(zhuǎn)錄因子 cMaf屬于巨噬細(xì)胞激活因子（ macrophageactivating factor， Maf）家族 ，此家族成員均擁有高度保守的氨基端激活域和羧基端堿性亮氨酸拉鏈 DNA結(jié)合域(extended