【正文】 如果獲得資助，我與本 項(xiàng) 目組成員將嚴(yán)格遵守廣東省自 然科學(xué) 基金委員會(huì)的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時(shí)間，按計(jì)劃認(rèn)真開展研究工作，按時(shí)報(bào)送有關(guān)材 料。工作人員有從事分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的技術(shù)人員，還配有細(xì)胞培養(yǎng)及神經(jīng)元培養(yǎng)的專門實(shí)驗(yàn)室及技術(shù)員。同時(shí)我們的前期研究中 建立了納米材料介導(dǎo)的基因表達(dá)和基因沉默技術(shù)平臺(tái)，致力于多發(fā)性硬化發(fā)病機(jī)制的研究。 研究工作積累 （ 1）申請(qǐng)者的前期研究結(jié)果： 前期實(shí)驗(yàn)中我們進(jìn)行了以納米粒子 FAPEGPEI作為載體，介導(dǎo) TRAIL/CD雙基因治療大鼠膠質(zhì)瘤的相關(guān)研究，取得了較滿意的結(jié)果。 29(2),256260 (第一作者 , 影響因子 , SCI 收錄 ). 2. Fuhua Peng, Bin Zhang*, Xiufeng Zhong, Jin Li, Guihong Xu, Xueqiang Hu,Wei Qiu and Zhong Pei. Serum uric acid levels of patients with multiple sclerosis and other neurological diseases. Multiple Sclerosis 20xx。 近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的主要論著目錄（ *為第一作者）： 17 1 、 Bing Liang*, Fang Yuan, Xiaodong Cai, Ling Long, Ying Peng, Cong Gao. Tumortargeted Nonviral Vector FolatePEG PEI Mediated Combined Antitumor Effects of Cytosine Deaminase and TRAIL Genes in vitro. Brain Research, in reviewing. Bing Liang*, XinTao shuai, Chuyan Chan, Yangchao Chen, Yi Li, XiangPing Li, Dexian Zheng, Marie C Lin, HsiangFu Kung, MingLiang He, Ying Peng. The use of folatePEGgraftedhybranchedPEI nonviral vector for the inhibition of glioma growth in the rat. Biomaterials, 20xx (30): 4014– 4020.（ Biomaterials: Impact factor: .） B. Liang*, . He, . Xiao, Y. Li, . Chan, . Kung, . Shuai, Y. Peng. Synthesis and characterization of folatePEGgraftedhyperbranchedPEI for tumortargeted gene delivery, Biochem Biophys Res Commun , 20xx（ 367） : 874880. (BBRC: Impact factor： .) 李藝，彭英，梁兵，廖奕佶，龍玲。實(shí)用診斷與治療雜志， 20xx； 04： 246－ 248。 高聰 *，謝富華，區(qū)騰飛。目前已有多篇相關(guān)英文文章正在撰寫和投稿審閱中，有望近期發(fā)表。課題組人員結(jié)構(gòu)安排合理，所有成員均接受過(guò)正規(guī)的科研培訓(xùn)，具備良好的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)和組織病理學(xué)等與本研究密切相關(guān)的基礎(chǔ)理論和技術(shù)，有信心有能力保證本課題的順利完成。 （ 3） 完善的實(shí)驗(yàn)室條件 本課題是一跨學(xué)科的研究，將以廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院和中山大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院為平臺(tái)完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程。 （ 4）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 12 數(shù)據(jù)擬采用 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料采用 sx? 表示，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示， 分別采用 t 檢驗(yàn)、方差分析比較均值間的差異，計(jì)數(shù)資料則采用卡方檢驗(yàn)。 ③ 將 cMaf siRNA 和 pcDNA4/cMaf 利用靶向納米材料 分別轉(zhuǎn)染 PBMC 細(xì)胞株，經(jīng)RTPCR 和 Western blot 檢測(cè) cMaf 表達(dá)變化，同時(shí)檢測(cè) cMaf 的表達(dá)改變對(duì) IL4 表達(dá)的影響，觀察兩者是否成正相關(guān)。 ② 細(xì)胞培養(yǎng)：體外培養(yǎng) 人 和大鼠 外周血單個(gè)核細(xì)胞（ PBMC） 株。 研究?jī)?nèi)容： （ 1）明確 cMaf 和 IL4 在多發(fā)性硬化病人的血液和腦脊液 PBMC 中的表達(dá)特性 采用熒光定量 RTPCR、 western blot 以及免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè) 多發(fā)性硬化病人的血液和腦脊液 PBMC 中 cMaf 和 IL4 的表達(dá)特性，分析 兩 者在正 常與 MS 免疫細(xì)胞中 的相關(guān)性表達(dá)。148:239250. 10 Mariotti S, Sargentini V, Marcantonio C, Todero E, Teloni R, Gagliardi MC, Ciccaglione AR, Nisini R: Tcellmediated and antigendependent differentiation of human monocyte into different dendritic cell subsets: A feedback control of th1/th2 responses. Faseb J 20xx。 參考文獻(xiàn) 1 Klauer T, Zettl UK: Compliance, adherence, and the treatment of multiple sclerosis. J Neurol 20xx。 IL4 基因定位于 11 號(hào)染色體。以往認(rèn)為，cMaf激活后不影響其他 Th2型細(xì)胞因子的表達(dá)，只是通過(guò)選擇性地與 IL4近側(cè)啟動(dòng)子結(jié)合，誘導(dǎo) IL4表達(dá)促使 Th2分化 [8]。在挖掘文獻(xiàn)的過(guò)程中， 細(xì)胞因子白介素4（ interleukin4, IL4） 吸引了我們的注意力 [4]。 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀 隨著對(duì)分子生物學(xué)的深入研究和生物技術(shù)的飛速發(fā)展，在各種基因工程細(xì)胞因子、分子靶向類藥物和治療性抗體通過(guò)美國(guó) FDA 認(rèn)證成功上市，并應(yīng)用于臨床后， 基因治療再次成為萬(wàn)眾矚目的焦點(diǎn)。 留學(xué)回國(guó)人員 —— 指在國(guó)外取得學(xué)位或訪問(wèn)學(xué)者一年以上的回國(guó)人員。 基礎(chǔ)研究──指以認(rèn)識(shí)自然現(xiàn)象、探索自然規(guī)律為目的，不直接考慮應(yīng)用目標(biāo)的研究活動(dòng)。 本項(xiàng)目在前期研究和文獻(xiàn)挖掘的基礎(chǔ)上，推測(cè) cMaf通過(guò)去甲基化組蛋白調(diào)控 IL4與 MS發(fā)病 。申請(qǐng)書各 項(xiàng)內(nèi)容 ，應(yīng)實(shí)事求是，逐 條認(rèn)真 填寫。 三、封面右上角“順序號(hào)” 暫不用填 寫；“項(xiàng)目類別”欄由申 請(qǐng)者填寫 , 申請(qǐng)“省自然科學(xué)基金自由申請(qǐng)項(xiàng)目”此欄為“ A” , “省 自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目”為“ B”。簡(jiǎn)表中所有代碼，以國(guó)家自然科學(xué)基金規(guī)定的代碼為準(zhǔn)填寫。 研究期限──研究期限一般從申請(qǐng)的次年１月算起。 4 二、立論依據(jù) 請(qǐng)按以下提綱填寫： 研究意義（對(duì)基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合國(guó)際科學(xué)發(fā)展趨勢(shì)，論述項(xiàng)目的科學(xué)意義；對(duì)應(yīng)用基礎(chǔ)研究，著重 結(jié)合學(xué)科前沿、圍繞國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中的重要科技問(wèn)題，論述其應(yīng)用前景） 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀 本項(xiàng)目的創(chuàng)新之處 主要參考文獻(xiàn)及出處（格式：論文 —— 作者．題目．刊名．年份．卷 (期 )．頁(yè)碼／專著 —— 作者．書名．出版者．年份） 研究意義 多發(fā)性硬化（ Multiple Sclerosis， MS）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥性脫髓鞘性疾病 ， 其特征表現(xiàn)為脫髓鞘、局部 T 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)、軸突損害 及 神經(jīng)功能喪失 ， 迄今尚未明確其病因和發(fā)病機(jī)制，也尚無(wú)公認(rèn)的根治性措施， 因此，全面解析多發(fā)性硬化發(fā)病的分子機(jī)制，積極尋求切 實(shí)有效且安全可靠的治療新途徑，是有效控制多發(fā)性硬化從而提高患者生存質(zhì)量的關(guān)鍵 [1]。 為此 ，我們首次針對(duì) cMaf 在 多發(fā)性硬化 中的表達(dá)和功能進(jìn)行了一部分預(yù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明利用 siRNA 干擾 cMaf 的表達(dá)后， 免疫 細(xì)胞 因子 IL4 的 表達(dá)水平顯著下降 ，提示我們 cMaf 的表達(dá)失調(diào)參與了 多發(fā)性硬化的 發(fā) 病 ，但 cMaf 的下游基因是什么？又通過(guò)何種機(jī)制參與多發(fā)性硬化發(fā)病？還知之甚少。因而推測(cè) cMaf決定著 IL4在 Th2細(xì)胞中的特異性表達(dá) [4]。 IL1 IFNγ、 IL2 等 I 型細(xì)胞因子促使 Th0 向 Th1 分化，并抑制 Th2 細(xì)胞分化；而 IL IL IL IL6 等 II 型細(xì)胞因子則 促使 Th0 向 Th2分化，同時(shí)也抑制 Th1 細(xì)胞增殖 [11]。 受此啟發(fā)，結(jié)合 IL4 在 多發(fā)性硬化 中的表達(dá)特性，我們推測(cè)在 多發(fā)性硬化發(fā)病 中 低表達(dá)的 cMaf 可以 使 IL4 啟動(dòng)子區(qū) 的組蛋白去 甲基化修飾 減少 ， 不 能通過(guò)改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu) 來(lái)促進(jìn) 轉(zhuǎn)錄因子與其結(jié)合，也 不 能引起該基因啟動(dòng)子區(qū) CpG 島 去 甲基化，最終 導(dǎo)致 IL4 在 多發(fā)性硬化 的表達(dá)降低，使得 Th1/Th2 極化 異常 ，易于 產(chǎn)生自身免疫性疾病 。132:361371. 6 Hiramatsu Y, Suto A, Kashiwakuma D, Kanari H, Kagami SI, Ikeda K, Hirose K, Watanabe N, 7 Grusby MJ, Iwamoto I, Nakajima H: Cmaf activates the promoter and enhancer of the il21 gene, and tgf{beta} inhibits cmafinduced il21 production in cd4+ t cells. Journal of leukocyte biology 20xx 7 Ogawa K, Funaba M, Chen Y, Tsujimoto M: Activin a functions as a th2 cytokine in the promotion of the alternative activation of macrophages. J Immunol 20xx。31:22272235. 15 Nan CL, Lei ZL, Zhao ZJ, Shi LH, Ouyang YC, Song XF, Sun QY, Chen DY: Increased th1/th2 (ifngamma/il4) cytokine mrna ratio of rat embryos in the pregnant mouse uterus. J Reprod Dev 20xx。 本項(xiàng)目 一方面 將 通過(guò)熒光定量RTPCR 和 western blot 檢測(cè) 血液和腦脊液 PBMC 中 兩者的表達(dá)水平，通過(guò)統(tǒng)計(jì)