【正文】 女 B 代碼 01 專業(yè)技術(shù)職務(wù) 名稱 教授 學(xué)位 最終學(xué)位授予國(guó) 國(guó) (地區(qū) )名 中國(guó) 其他身份 A. 院士 □ B. 博 士 生 導(dǎo) 師 □ C. 在 站 博 士 后 □ D. 留學(xué)回國(guó)人員□ 代碼 011 C 代碼 86 所在單位 全稱 廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 系 (所 )及科室 神經(jīng)科學(xué)研究所 神經(jīng)內(nèi)科 項(xiàng)目組情況 主要成員（不含申請(qǐng)者） 姓名 身份證號(hào)碼 專業(yè)技術(shù)職務(wù) 所在單位全稱及代碼 項(xiàng)目中 的分工 簽章 梁兵 37028119780803265X 講師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 納 米 材 料的合成 周智美 440105197801294522 講師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 細(xì) 胞 學(xué) 實(shí)驗(yàn) 蒲蜀湘 430105196501233027 主任 醫(yī)師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 免疫組化 袁芳 430204198301094024 醫(yī)師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 基因轉(zhuǎn)染 張斌 140104197811302736 講師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 動(dòng) 物 模 型建立 侯清華 420xx4197603121612 講師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 文章撰寫 譚麗華 440105196408192429 主管技師 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 統(tǒng)計(jì)分析 林美 容 441702198406184285 碩士生 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 病 理 學(xué) 實(shí)驗(yàn) 占婷婷 360281198401095221 碩士生 廣州醫(yī)學(xué)院 51018201 分 子 生 物學(xué)實(shí)驗(yàn) 人員統(tǒng)計(jì) 總?cè)藬?shù) 高級(jí) 中級(jí) 初級(jí) 在站博士后 在讀博士 生 在讀碩士 生 參加單位數(shù) 10 2 5 1 2 1 2 3 研 究 內(nèi) 容 和 意 義 摘 要 我們最新的研究 發(fā)現(xiàn) cMaf 在 多發(fā)性硬化（ MS） 病人中表達(dá) 降低 ，提示其與 MS 發(fā)病相關(guān)； 同時(shí)發(fā)現(xiàn) IL4的 表達(dá) 也降低 ，提示我們 IL4和 cMaf同時(shí) 參與 MS發(fā) 病。終止時(shí)間為完成年度的１２月。 此外，經(jīng)文獻(xiàn)檢索未發(fā)現(xiàn)有關(guān) cMaf 在 多發(fā)性硬化 中的表達(dá)特性和功能研究的相關(guān) 5 報(bào)道。 抗原刺激機(jī)體時(shí)， Th 細(xì)胞所在局部微環(huán)境中的細(xì)胞因子類型是影響 Th1/Th2 極化的關(guān)鍵因素 [12]。177:67876794. 8 Leavenworth JW, Ma X, Mo YY, Pauza ME: Sumo conjugation contributes to immune deviation in nonobese diabetic mice by suppressing cmaf transactivation of il4. J Immunol 20xx。 問題二： 如何證實(shí) cMaf 通過(guò)招募其他效應(yīng)蛋白組成復(fù)合體引起 IL4 啟動(dòng)子區(qū)組蛋白甲基化從而抑制轉(zhuǎn)錄 的 ？ 本項(xiàng)目將利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)直接證實(shí)cMaf 對(duì) IL4 的轉(zhuǎn)錄抑制作用，然后通過(guò)免疫共沉淀、 ChIP 以及檢測(cè)甲基化的相應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法，明確 cMaf、 EHR 和 MAREs 是否 與 IL4 啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合以及組蛋白 是否 發(fā)生 去 甲基化 反應(yīng) ，并檢測(cè)該組蛋白修飾是否引起 IL4啟動(dòng)子區(qū) CpG 島 去 甲基化從而 導(dǎo)致 轉(zhuǎn)錄抑制。 ④ 采用 BSP 法檢測(cè) IL4 啟動(dòng)子區(qū) CpG 島是否發(fā)生去甲基化修飾，具體步驟如下：抽取 PBMC/cMaf 基因組 DNA，采用亞硫酸氫鈉修飾基因組 DNA，然后將修飾后的 DNA進(jìn)行純化回收，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道設(shè)計(jì)引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，隨后將 PCR 產(chǎn)物 與 T 載體連接、轉(zhuǎn)化和藍(lán)白斑篩選，然后挑克隆送測(cè)序 ，根據(jù)測(cè)序結(jié)果判斷 CpG 島是否發(fā)生甲基化 。 （ 4）有實(shí)力的研究隊(duì) 伍 申請(qǐng)人承擔(dān)并參與過(guò)多項(xiàng)國(guó)家及省部級(jí)課題，大部分課題已順利結(jié)題，具備豐富的組織項(xiàng)目和實(shí)施工作的經(jīng)驗(yàn)。 NFκBp65及環(huán)氧化酶－ 2在實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎中的表達(dá)及其作用機(jī)制。20xx－ 20xx年攻讀博士學(xué)位期間研究方向?yàn)榧{米材料介導(dǎo) 的基因治療。 （ 3）廣東省科技計(jì)劃（ － ）項(xiàng)目編號(hào)： 20xxB0130801363，項(xiàng)目名稱：ABCD2 評(píng)分結(jié)合神經(jīng)影像預(yù)測(cè) TIA 預(yù)后的前瞻性臨床研究。本課題組所在實(shí)驗(yàn)室是廣東省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。以下為需要說(shuō)明的其它問題： 在 預(yù) 申報(bào)中，合作單位暫不用蓋章。 實(shí)驗(yàn)所需的試劑及相應(yīng)的抗體國(guó)內(nèi)外均可購(gòu)買，重組質(zhì)粒目前已成功通過(guò)克隆出來(lái)，正進(jìn)行測(cè)序。 30(2): 8590. (第二作者 , 影響因子 18 , SCI收錄 ). （四）承擔(dān)科研項(xiàng) 目情況： （ 1） 廣東省科技廳資助項(xiàng)目 （ － ），項(xiàng)目編號(hào)： 20xxB36004006“ NgR在多發(fā)性硬化中的表達(dá)及 NgR(310)ectoFc的干預(yù)治療” ， 項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：高聰。地黃合劑對(duì)多發(fā)性硬化的作用及其作用靶點(diǎn)的研究。 近年部分論文（ *為通訊作者）： Shijie Liang, Fuhua Xie, Tengfei Ou, JieYang, XinFeng, Cong Gao*. Y39983, a Selective RhoKinase Inhibitor, attenunates experimental autoimmune encephalomyelitis via inhibition of demyelination. （ Toxicology and Applied Pharmacology， Impact factor： ， 16 In press） . 2 、 Bing Liang, Fang Yuan, Xiaodong Cai, Ling Long, Ying Peng, Cong Gao*. Tumortargeted Nonviral Vector FolatePEG PEI Mediated Combined Antitumor Effects of Cytosine Deaminase and TRAIL Genes in vitro. （ Brain Research, in reviewing） . 高聰 *，鄭建箏，謝富華。本實(shí)驗(yàn)室擁有分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作所需的所有儀器設(shè)備。 （ 3）證實(shí) cMaf 通過(guò)引起 IL4 啟動(dòng)子去甲基化啟動(dòng)該基因的轉(zhuǎn)錄 ① PCR 擴(kuò)增 IL4 基因上游 區(qū)域的基因組序列，克隆到 pGL3 熒光素酶報(bào)告基因載體，重組質(zhì)粒經(jīng)鑒定正確后，轉(zhuǎn)染 PBMC/cMaf 細(xì)胞株，通過(guò)檢測(cè)熒光素酶活性的改變，證實(shí) cMaf 與 IL4 啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合且發(fā)揮轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)作用。 （ 2）探討 cMaf 和 IL4 表達(dá)失調(diào)對(duì)多發(fā)性硬化發(fā)病的影響 分別通過(guò)過(guò)表達(dá)和 RNA 干擾改變 cMaf 和 IL4 表達(dá)水平，觀察其對(duì)多發(fā)性硬化PBMC 細(xì)胞活力和免疫特性的影響。255 Suppl 6:26. 3 Ji J, Shi J, Budhu A, Yu Z, Fues M, Roessler S, Ambs S, Chen Y, Meltzer PS, Croce CM, Qin LX, Man K, Lo CM, Lee J, Ng IO, Fan J, Tang ZY, Sun HC, Wang XW: Microrna expression, survival, and response to interferon in liver cancer. N Engl J Med 20xx。 Th1/Th2 極化是免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)， Th1/Th2 平衡失調(diào)是許多疾病的分子免疫基礎(chǔ)，因而 Th1/Th2 極化已成 目 研究的新熱點(diǎn) [10]。 為了探尋 多發(fā)性硬化 的發(fā) 病 機(jī)理，項(xiàng)目申請(qǐng)人所在的研究團(tuán)隊(duì)一直致力于篩選并鑒定調(diào)控 多發(fā)性硬化 發(fā) 病 的關(guān)鍵基因。 申報(bào)學(xué)科──申請(qǐng)項(xiàng)目所屬的最基礎(chǔ)學(xué)科。外來(lái)語(yǔ)要同時(shí)用原文和中文表 達(dá) 。 本項(xiàng)目如獲成功 ，不但為 多發(fā)性硬化 發(fā)生機(jī)理提供新的理論依據(jù)，還將為尋找 多發(fā)性硬化 的分子標(biāo)志物和基因治療的新靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 參加單位數(shù)──指研究項(xiàng)目組主要成員所在單位數(shù)，包括主持單位和合作單位 (合作者所在單位 )，以阿拉伯?dāng)?shù)字表示。 cMaf缺陷小鼠 CD4+T細(xì)胞 IL4的合成障礙，而 IL IL IL13的合成不受影響。 IL4 與其中任何一種受體結(jié)合都能激活 STAT6。124:8894. 13 Leng J, Yao H, Shen J, Wang K, Zhuo G, Wang Z: Coexpression of il18 binding protein and il4 regulates th1/th2 cytokine response in murine collageninduced arthritis. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai) 20xx。實(shí)驗(yàn)按常規(guī)方法進(jìn)行，具體步驟如下：已固定的 PBMC 細(xì)胞爬片經(jīng)血清封閉后，使用 mouse anti IL4 antibody（ sc28361）和 rabbit anticMaf antibody（ sc7866）同時(shí)進(jìn)行一抗孵育， PBS 緩沖液洗片后用不同標(biāo)記的二抗即 Alexa Fluor 555conjugated antirabbit antibody（ CatCST4413）和 Alexa Fluor 555conjugated antimouse antibody（ CatCST4408）同時(shí)孵育，充分洗片后封片觀察，應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡掃描成像 。 技術(shù)路線： 可行性分析： （ 1）堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ) 前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果已明確表明 cMaf 在 MS 患者血液和腦脊液 PBMC 中 低 表達(dá)，提示檢測(cè) cMaf和 IL4在 MS病人的血液和腦脊液中的相關(guān)性表達(dá) 在 PBMC 細(xì)胞中過(guò)表達(dá)和干擾 cMaf 在 PBMC 細(xì)胞中過(guò)表達(dá)和干擾 IL4 cMaf 通過(guò)組蛋白 去 甲基化 調(diào)控 IL4 參與MS 發(fā)病 cMaf 對(duì) IL4的轉(zhuǎn)錄啟動(dòng) EHR與 IL4啟動(dòng)子結(jié)合 cMaf、 EHR 和MAREs 形成復(fù)合體 IL4 啟動(dòng)子去甲基化 觀察 cMaf 和 IL4 表達(dá)失