實(shí)驗(yàn)一質(zhì)粒dna的提取和鑒定(已修改)
2025-05-27 07:23 本頁(yè)面
【正文】 質(zhì)粒 DNA的提取和純化 鄭 敏 生化與分子生物學(xué)系 分子生物學(xué) ? 從 分子水平 上研究生命現(xiàn)象物質(zhì)基礎(chǔ)的學(xué)科。研究細(xì)胞成分的物理、化學(xué)的性質(zhì)和變化以及這些性質(zhì)和變化與生命現(xiàn)象的關(guān)系，如遺傳信息的傳遞，基因的結(jié)構(gòu)、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯、表達(dá)調(diào)控和表達(dá)產(chǎn)物的生理功能，以及細(xì)胞信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)等。 基因工程 移液器和 EP管 質(zhì) 粒 ? 質(zhì)粒主要發(fā)現(xiàn)于細(xì)菌、放線菌和真菌細(xì)胞中， 獨(dú)立于染色體之外的、能自主復(fù)制的雙鏈環(huán)狀 脫氧核糖核酸 物質(zhì)。 ? 質(zhì)粒的存在使宿主具有一些額外的特性，如對(duì)抗生素的抗性等。 F質(zhì)粒 (又稱 F因子或性質(zhì)粒 )、 R質(zhì)粒 (抗藥性因子 )和 Col質(zhì)粒 (產(chǎn)大腸桿菌素因子 )等都是常見(jiàn)的天然質(zhì)粒。 ? 能穩(wěn)定地 獨(dú)立存在 于染色體外，并傳遞到子代，一般不整合到宿主染色體上。 ? 現(xiàn)在常用的質(zhì)粒大多數(shù)是經(jīng)過(guò)改造或人工構(gòu)建的，常含抗生素抗性基因，是 重組 DNA技術(shù) 中重要的工具。 分類： ?單拷貝質(zhì)粒； ?多拷貝質(zhì)粒 ； ?緊密控制型； ?松弛控制型； 質(zhì)粒 DNA的提取方法 ? 堿裂解法； ? 煮沸裂解法； ? 酚氯仿抽提法； 概括起來(lái)主要是用非離子型或離子型 去污劑 、 有機(jī)溶劑或堿 進(jìn)行處理及用 加熱 處理。 基本思路 1. 培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴(kuò)增； 2. 收集和 裂解細(xì)菌 ； 3. 分離質(zhì)粒 DNA(有時(shí)還要求純化質(zhì)粒 DNA，根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需 ) 4. 電泳檢測(cè)； 堿裂解法的基本原理 ? 十二烷基磺酸鈉 (SDS) 可使 細(xì)胞膜裂解 。 ? 經(jīng) SDS處理后，細(xì)菌染色體 DNA會(huì)纏繞附著在細(xì)胞碎片上，同時(shí)由于細(xì)菌染色體 DNA比質(zhì)粒大得多，易受機(jī)械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性片段。 ? 當(dāng)用強(qiáng)熱或酸、堿處理時(shí)，細(xì)菌的線性 染色體 DNA變性 ，而共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA(Covalently closed circularDNA，簡(jiǎn)稱cccDNA)的兩條鏈不會(huì)相互分開。 ?
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